RNA变性电泳法检测RNA质量

采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法如下:
⑴ 凝胶制备：
制备1.2%琼脂糖凝胶（电泳槽体积为50ml）
① 称取0.6g琼脂糖，加入43.5ml水，加热溶解并降温到60℃。
② 加入5ml 10×甲醛变性电泳缓冲液，并加入1.5ml 37%的甲醛，混合均匀。
③ 倒入电泳槽中制胶（甲醛有毒，制胶应在通风橱中进行）。
⑵ RNA模板准备（5~7.5μg total RNA）
① 制备如下混合液 （9.7μl）
10×甲醛变性电泳缓冲液： 1.25μl
37%的甲醛： 2.2μl
甲酰胺： 6.25μl

② 加入2.8μl RNA，使总体积达到12.5μl
③ 混合后离心5~10 sec（1 000~2 000 r/min）
④ 55℃加热15 min
⑤ 加入2.5μl甲醛凝胶加样缓冲液，再加点EB（约0.2~0.5μl），混合后离心5 sec
⑥ 将样品加入点样孔
⑦ 在5v/cm的电压下电泳至溴酚蓝带跑到电泳槽中央（20cm长电泳槽，用95v电压，1小时左右）