LXKathy
请问RIP出的RNA,怎么去检测具体有哪些RNA呢,我看试剂盒写的qPCR或者NGS。如果是qPCR,我应该选用内参基因作为标准归一化后,再比较IgG组与IP组吗?此外,测出来的RNA,下游验证怎么做呢?我看EMSA,Northern blotitng都可以,但是我太会这两种方法,有师兄师姐可以教教我吗?有什么注意事项?此外,CLIP技术有人会吗?我想用这个方法去验证互作的位点。麻烦各位大佬教教我。感谢万分
土井挞克树
你提到的两种方法都可以,这两种方式检测rna都是比较基本的,按照教程来就可以。
huarenqiang5
利用RNA结合蛋白的抗体免疫沉淀RNA/蛋白复合物,再从沉淀的RNA/蛋白复合物中分离得到特定RNA结合蛋白的RNA;分离得到的RNA可以通过末端标记和变性胶电泳对RNA分子的大小进行鉴定,也可以利用高通量RNA测序方法对RNA序列进行分析。
loveliufudan
qPCR和NGS是两种不同的RNA定量方法,qPCR适用于对单个或少数几个RNA分子进行定量,而NGS可以对整个RNA组进行定量和分析。
对于aPCR,内参基因通常被用作归一化参考基因。因此,通过与内参基因的比较,可以确定不同样本中RNA的相对表达量。
RNA的下游验证包括多种方法,例如EMSA和Northern blotting,这些方法可以验证RNA的翻译产物,以及它们是否与蛋白质结合。不过,这些技术可能较为复杂。
CLIP技术(Cross-linking and Immunoprecipitation)是一种用于分析RNA-protein互作的方法。该技术通过紫外线交联将RNA和其相邻的蛋白质结合在一起,然后通过免疫沉淀分离RNA-protein复合物,最后对分离的RNA进行测序分析以验证RNA-protein互作位点。使用CLIP技术需要丰富的经验和相关设备,也是比较复杂的。
LXKathy
请问如果是我自己做EMSA, Northern blot,还有clip.。有protocol吗🌝
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