流式课堂 | 细胞周期检测三大常见问题及解决方案

细胞周期（cell cycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞周期的研究对于深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。如：在癌症治疗中，G0 期细胞对化疗不敏感，癌细胞难以被有效杀灭，往往成为日后癌症复发的根源。通过诱导 G0 期癌细胞进入细胞周期，提高化疗敏感性，可以有效杀伤癌细胞。

细胞周期的检测，主要是利用细胞内 DNA 能够和某些特定荧光染料（如碘化丙啶，PI）结合的特性。由于细胞各个时期的DNA 含量不同，其结合的荧光染料的量也不同，通过流式细胞仪检测荧光强度，即可反映细胞周期变化情况。

此检测方法操作简便，仅需简单的固定染色即可进行检测，但很多同学做出来的结果还是不够理想。本文将带大家来看看细胞周期检测中常见的问题及解决方案：

细胞周期检测中，CV 是指 G0/G1 期峰变异系数(Coefficient of Variance，CV)，是评价周期结果好坏的一个重要指标，其值越小越好。CV 值过大的异常原因及相应解决方案如下：

进行周期检测时，发现 G2/M 期缺失，首先要确定我们所检测的细胞是能够进行分裂增殖的，如：外周血淋巴细胞在正常情况下基本都是不会进行增殖的，处于 G0 期。

此外，如果细胞培养条件不对或营养不足，引起细胞生长缓慢，也会导致大量细胞进入 G0 期。此时需及时优化培养条件，否则时间一长会引起细胞状态变差，直至细胞死亡。

很多细胞生长密度过高，会出现接触抑制，同样会导致 G2/M 期缺失。当细胞产生接触抑制，就无法再增殖——因此，如果实验处理组是促进细胞生长，或导致 G2/M 期阻滞，有可能会出现完全检测不出来的情况，严重影响对实验结果的判断。所以，在进行细胞周期实验时，一定要保证检测时细胞尚有合理的生长空间。

03 正常体细胞周期检测出现 8 倍体或 4 倍体比例过高

大多数情况下，哺乳动物的正常体细胞为 2 倍体或 4 倍体，且 G0/G1 期比例远高于 G2/M 期。当正常体细胞周期检测出现 8 倍体，或 4 倍体比例过高时，多为粘连体导致，因此在进行细胞周期实验时，需采用 PI-A + PI-H 来排除粘连体，才能得到正确的结果。