流式配色基本原则
Elabscience
流式配色遵循以下基本规则：
强弱搭配
选择干扰少的荧光组合
使分析的复杂程度降到最低
谨慎使用串联染料
注意环境因素对荧光素的影响
我们要如何理解这段话呢？
「强弱搭配」，指的是目标 Marker 表达量和荧光素的强度要做到强弱搭配，如果出现强强搭配时，强荧光对弱荧光有干扰的话，那么弱弱组合就像大象身边的狗尾巴草，或者白天的萤火虫，会被完全忽视掉。
不同于 WB、IHC、IF 或者 ELISA 检测等单指标检测方法，流式实验一般是多指标检测，仪器检测荧光素的时候，可能会被其他荧光素发出的光干扰。高中物理老师说过：「光具有波粒二象性」。
手机/相机拍照时，只需要「咔嚓」一下，就可以把五颜六色收集到一起；而流式细胞仪以光波的形式，分段接收、检测荧光。
我们可以回想一下：听收音机的时候，如果有电话打进来，收音机会受到电话信号的无线电干扰，发出「呲呲」的声音。同样地，流式细胞仪在检测某个颜色的光波时，可能会受到相邻颜色荧光信号的干扰，所以，在做流式配色时，我们要「选择干扰少的荧光组合」。
受制于流式细胞仪的配置，出现荧光干扰在所难免。如何将这种影响降到最低呢？
首先，实验需要设置单阳对照，用于调节补偿。在做数据分析时，为了将这种荧光干扰降到最低，可以考虑将有溢漏的荧光素，放在相互排斥的 Marker 上。
其次，如果是共表达的 Marker，在表达量高的情况下，是允许溢漏的。
最后，配色时需要考虑 Marker 的亲子代关系，子代可以向亲代溢漏，亲代不可以向子代溢漏。这么做是为了「使分析的复杂程度降到最低」。
如果目标 Marker 较少，比如三色、四色等，应尽量选择单体染料（例如：FITC、PE、APC 等）。如果检测 Marker 较多，或者流式细胞仪激光器受限，串联染料（PE/Cyanine5、PerCP/Cyanine5.5 等）的使用，是非常有必要的。
大部分串联染料，在光照或者实验操作有「固定」步骤时，容易出现降解。所以，在实验过程中，要避免对串联染料进行固定，同时，要严格按照实验标准化流程操作，避免荧光素降解引起的实验问题。
除了刚才提到的光照和「固定」，容易对串联荧光素造成影响外，串联染料的长期孵育，也会对结果造成影响。因此，细胞染色后，请尽快安排上机检测，特别是在串联染料不便固定时。另外，FITC 对低 pH 环境敏感，如果您的样本 pH 值较低，一定要注意避免使用 FITC 染料。
关于流式配色的基本原则，就是上面提到的这些。
