大分子物质的水解试验

实验四十 大分子物质的水解试验

　　一、目的要求

　　证明不同的微生物对复杂有机大分子的水解能力不同，从而说明不同的微生物有不同的酶系统。

　　二、基本原理

　　细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。

　　三、器材

　　金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，绿脓杆菌（Bacte-rium Pyocyaneum）斜面各一支；

　　油脂培养基，淀粉培养基，明胶培养基，无菌平皿，接种环和接种针，革兰氏染色用卢戈氏碘液（Lugol's iodine solution）等。

　　四、操作步骤

　　1．油脂水解试验

　　(1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时，充分振荡，使油脂均匀分布，用无菌操作倒入平皿中，待凝。

　　(2)将制成的平板用记号笔划成两半，一半接种金黄色葡萄球菌作为对照，另一半接种枯草芽孢杆菌作为试验菌，均用无菌操作画“ ”接种，如图Ⅹ-1。

　　(3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。

　　(4)取出平板，观察平板底层长菌的地方，如出现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。

　　2．淀粉水解试验

　　(1)将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作制成平板。

　　(2)用记号笔将平板划成两半，一半接种大肠杆菌作为试验菌，另一半接种枯草芽孢杆菌作为对照菌，均用无菌操作划线接种，如图Ⅹ-2。

　　(3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。

　　(4)将已培养24小时的平皿取出，打开皿盖，滴加少量卢戈氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿，使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解。透明圈的大小、说明该菌水解淀粉能力的强弱。

　　3．明胶液化试验

　　(1)取三管明胶培养基，用记号笔标明各管接种的菌名。分别以无菌操作用接种针穿刺接种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌。

　　(2)接种后，置20℃温室中培养2—5天。

　　(3)观察明胶培养基液化情况（图Ⅹ-3）。

　　五、实验报告

　　结果

　　将结果填入下表。“ ”表示阳性；“-”表示阴性。