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植物组织中过氧化氢含量的测定

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7265

实验原理

H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

实验试剂

100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57μl,溶于100ml,再稀释100倍;
2mol/L硫酸;
5%(W/V)硫酸钛;
丙酮;
浓氨水。

实验设备

研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。

实验材料

受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。

实验步骤

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表1加入试剂。

表1  测定H2 O2 浓度标准曲线配置表  

试剂(ml)

离  心  管  号

1

2

3

4

5

6

7

100μmol/L H2 O2

0

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

4℃下预冷丙酮

1.0

0.9

0.8

0.6

0.4

0.2

0

5%硫酸钛

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

浓氨水

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

 

3000r/min 离心10min,弃去上清夜,留沉淀

2mol 硫酸

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

 
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