简介
植物组织中的酚类物质在多酚氧化酶的催化下被氧化为醍，醍可自动聚合成有 色物质，发生褐变。因此，对植物组织内酚类物质进行定量测定具有一定意义，是植物抗性生 理研究中经常用到的一个指标。本实验的目的在于学习测定酚类物质含量的原理及方法。
原理
植物组织中酚类物质含量的测定的基本原理是酚类物质含量测定常采用 Folin-酚法。酚类物质在碱性条件下可与 Folin-酚试 剂中的磷鸨酸和磷钥酸反应生成鸨蓝和钥蓝化合物，该物质在 700 nm 处有最大光吸收，其吸 光度的大小与酚类物质的含量成正比。因此，通过测定吸光度的大小即可测定植物组织中酚 类物质的含量。
材料与仪器
材料：各种植物组织。
仪器: 分光光度计，离心机，研钵，试管，试管架，移液管等。
试剂：
(1)Folin-酚试剂：称取钨酸钠 25 g 和磷钼酸 5 g, 放入回流瓶中，加 12.5 mL 磷酸和 188 mL 蒸馏水，一起回流煮沸 2 h, 冷却后用蒸馏水定容至 1 000 mL。
(2)10% Na2CO3：称取 10 g Na2CO3 溶于 100 mL 蒸馏水中。
(3) 标准酚溶液：0.45 mmol L-1邻苯二酚溶液。
步骤
植物组织中酚类物质含量的测定的基本过程可分为如下几步：
1 . 酚类物质的提取：称取 1 g 植物材料，加少量水研磨成匀浆，充分洗涤研钵，定容至 100 mL。用时可适当稀释。
2. 标准曲线的制作：按表 56-1加入各种试剂，混匀，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振摇，室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度。以酚溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制标准曲线。
表 56-1 标准曲线制作加样表
3. 样品酚含量的测定：将提取液适当稀释，吸取 2 mL 置于试管中，加 2 mL Folin-酚试 剂，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振摇，室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度，在 标准曲线上查出对应的酚浓度。
4. 结果计算：
式中：c 一为从标准曲线上查得的酚浓度，μmol・mL-1；
V—为样品体积,mL；
W —为样品质量，g。
注意事项
酚类物质提取时避免被氧化。
来源：丁香实验
