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植物组织中淀粉含量的测定

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3311
【原理】

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。

【 仪器 与用具】

电子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小试管若干支;电炉;刻度吸管0.5ml×1,2.0ml×3,5ml×4;分光光度计;记号笔。

【 试剂 】

(1)浓硫酸(比重1.84);

(2)9.2mol/L HClO 4

(3)2%蒽酮 试剂 :同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);

(4)淀粉标准液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60~70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,即为每ml含淀粉100μg的标准液。

【方法】

1.标准曲线制作

取小 试管 11支从0~10编号,按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,见方法一或方法二,绘制相应的标准曲线。

表24-3 各 试管 加入标准液和蒸馏水量

管 号

0

1~2

3~4

5~6

7~8

9~10

淀粉标准液(ml)

0

0.4

0.8

1.2

1.6

2.0

蒸 馏 水(ml)

2.0

1.6

1.2

0.8

0.4

0

淀粉含量(mg)

0

40

80

120

160

200

2.样品提取

将提取可溶性糖以后的残渣,移入50ml容量瓶中,加20ml热蒸馏水,放入沸 水浴 中煮沸15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷却后,混匀,用滤纸过滤,并用 蒸馏 水定容(或以2500r/min离心10min)。

3.测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时,在单糖残基上加了1分子水,因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

淀粉含量(%)=

式中 C-标准曲线查得的淀粉含量(μg);

V-提取液总量(ml);

a-显色时取液量(ml);

W-样品重(g)。

注:淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品,在酸解过滤后,将其残渣加上2ml水,搅拌均匀,吸2滴于白瓷盘上,加2滴I 2 -KI溶液,显微镜下观察,若出现紫蓝色颗粒,证明水解不完全,其正式测试样品需再加高氯酸水解,直至不出现蓝紫色为止。

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