淀粉含量的测定

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【原理】

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

【仪器与用具】

电子天平;容量瓶：100ml×4，50ml×2;漏斗;小试管若干支;电炉;刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4;分光光度计 ;记号笔。

【试剂】

(1)浓硫酸(比重1.84);

(2)9.2mol/L HClO4;

(3)2%蒽酮试剂：同蒽酮法(或9%苯酚，同方法一);

(4)淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。

【方法】

1.标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号	0	1～2	3～4	5～6	7～8	9～10
淀粉标准液(ml)	0	0.4	0.8	1.2	1.6	2.0
蒸 馏 水（ml）	2.0	1.6	1.2	0.8	0.4	0
淀粉含量（mg）	0	40	80	120	160	200

2.样品提取

将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容(或以2500r/min离心10min)。

3.测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子 水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

淀粉含量(%)=

式中 C-标准曲线查得的淀粉含量(μg);

V-提取液总量(ml);

a-显色时取液量(ml);

W-样品重(g)。

注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止