植物组织中淀粉含量的测定

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【原理】

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

【仪器与用具】

电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计 ；记号笔。

【试剂】

（1）浓硫酸（比重1.84）；

（2）9.2mol/L HClO4；

（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；

（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。

【方法】

1．标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号

0

1～2

3～4

5～6

7～8

9～10

淀粉标准液(ml)

0

0.4

0.8

1.2

1.6

2.0

蒸 馏 水（ml）

2.0

1.6

1.2

0.8

0.4

0

淀粉含量（mg）

0

40

80

120

160

200

2．样品提取

将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。

3．测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子 水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

淀粉含量（%）=

式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；

V－提取液总量（ml）；

a－显色时取液量（ml）；

W－样品重（g）。

注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。