简介
植物组织中的酚类物质在多酚氧化酶的催化下被氧化为醍，醍可自动聚合成有 色物质，发生褐变。因此，对植物组织内酚类物质进行定量测定具有一定意义，是植物抗性生 理研究中经常用到的一个指标。本实验的目的在于学习测定酚类物质含量的原理及方法。
原理
酚类物质含量测定常采用 Folin-酚法。酚类物质在碱性条件下可与 Folin-酚试 剂中的磷鸨酸和磷钥酸反应生成鸨蓝和钥蓝化合物，该物质在 700 nm 处有最大光吸收，其吸 光度的大小与酚类物质的含量成正比。因此，通过测定吸光度的大小即可测定植物组织中酚 类物质的含量。
材料与仪器
1. 材料：各种植物组织。
2. 试剂：
(1)Folin-酚试剂：称取鸨酸钠 25 g 和磷铝酸 5 g, 放入回流瓶中，加 12.5 mL 磷酸和 188 mL 蒸馋水，一起回流煮沸 2 h, 冷却后用蒸僭水定容至 1 000 mL。
(2)10% Na2CC)3：称取 10 g Na2CO3 溶于 100 mL 蒸儒水中。
(3) 标准酚溶液：0.45 mmol - 邻苯二酚溶液。
3. 仪器: 分光光度计，离心机，研钵，试管，试管架，移液管等。
步骤
1 . 酚类物质的提取：称取 1 g 植物材料，加少量水研磨成匀浆，充分洗涤研钵，定容至 100 mL。用时可适当稀释。
2. 标准曲线的制作：按表 56」加入各种试剂，混匀，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振 摇，室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度。以酚溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制标准曲线。
表 56-1 标准曲线制作加样表
| 试剂 | 试管编号 | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| 标准酚溶液/mL | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 蒸儒水/mL | 2.0 | 1.8 | 1.6 | 1.4 | 1.2 | 1.0 |
| 最终浓度/(卩 mol • mL-1) | 0 | 45 | 90 | 135 | 180 | 225 |
| Folin-酚试剂/mL | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
3. 样品酚含量的测定：将提取液适当稀释，吸取 2 mL 置于试管中，加 2 mL Folin-酚试 剂，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振摇，室温下静置 1 h 后测定其在 700 nm 处的吸光度，在 标准曲线上查出对应的酚浓度厂
4. 结果计算：
c X V
酚含量 (Mmol- g-,) = —
式中：c 一为从标准曲线上查得的酚浓度，卩 mol・mL 1；
V—为样品体积,mL；
W —为样品质量»go
注意事项
酚类物质提取时避免被氧化。
常见问题
测定植物组织中酚类物质的含量有何意义？
来源：丁香实验
