细胞株的培养、冻存和复苏

细胞株的培养、冻存和复苏

 

1 ）细胞株的培养和传代

 

培养：

用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含 10 ％小牛血清和抗生素的培养液中，培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养， 3 ～ 4 天传代一次。

 

 

悬浮生长细胞的传代：

直接直接吸去或离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液悬浮细胞， 1 ： 3 或 1 ： 5 稀释细胞后，分瓶继续培养。

 

 

帖壁生长细胞的传代：

吸去培养液，用 PBS 洗涤细胞一次，加入消化液，在 37 ℃中消化约 3 ～ 10 分钟，待细胞开始脱落时，倒去消化液，加入新鲜培养液，悬浮和吹打分散细胞。也可以待细胞完全消化脱落， 500 × g 离心 5 分钟，去除消化液，用新鲜培养液悬浮细胞。 1 ： 3 或 1 ： 5 稀释细胞后，分瓶继续培养。

 

 

2 ）细胞株的冻存：

 

1． 取培养 2 ～ 3 天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成 2 × 10⁶ ～ 2 × 10⁷ /ml 。

2． 在 1ml 细胞冻存管中加入 0.5ml 细胞悬液， 0.4ml 小牛血清和 0.1ml 二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置 4 ℃ 1 小时，－ 20 ℃ 2 小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。

 

 

3 ）细胞株的复苏：

 

复苏时，从液氮中取出冻存管，立即置 37 ℃水浴中融化细胞。将细胞直接加入 10ml 含 15 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液中，置 37 ℃ 5 ％ CO₂ 饱和水汽二氧化碳培养箱中培养。悬浮细胞待细胞全部沉降后小心吸去上清液，更换新鲜的上述培养液，继续培养；帖壁细胞则培养 2 ～ 3 小时，待细胞帖壁后，倒去培养液，更换新鲜的上述培养液，继续培养。也可以在加入新鲜培养液以后， 500 × g 离心 5 分钟，去上清液，加入新鲜培养液，继续培养。