冻存胚胎、精子、卵巢的复苏

冻存（cryopreservation）是生物材料保存的主要方法之一。利用冻存技术将胚胎、配子或卵巢置于-196 ℃液氮中低温保存，可以使胚胎、配子或卵巢暂时脱离生长状态而将其生理特性保存起来，这样在需要的时候再复苏用于实验。

适度地保存一定量的胚胎、配子或卵巢，可以防止因意外事件而造成丢种，起到了胚胎、配子或卵巢的保种作用。

除此之外，还可以利用冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些特殊基因型的胚胎、配子或卵巢。

器材：

③37 ℃ 5％ 的CO₂培养箱

试剂：

冻存胚胎、精子、卵巢复苏的基本过程如下：

1．冻存胚胎的复苏 从液氮中取出胚胎冻存管，室温放置30秒；用移液器吸取预热到37 ℃的0.25 mol／L的蔗糖溶液0.9 ml，加入冻存管内；迅速来回吹吸约10次，回收胚胎。

用新鲜的含10％ 胎牛血清的1640基础培养液洗涤3次；镜下检查形态正常的胚胎。

2．冻存精子的复苏 从液氮中取出精子冻存的麦管，室温停留10秒；立即投入37 ℃水浴中解冻10～15分钟；离心去除冻存保护剂；将复苏的精子移入已经预先预热好的获能液滴中；37℃ 5％ 的CO₂培养箱中获能30～60分钟。

3．冻存卵巢的复苏 将冻存管从液氮中取出；加入37 ℃的0.25 mol／L的蔗糖溶液，反复吹打数次，加速卵巢的复苏；将复苏的卵巢从0.25 mol／L的蔗糖溶液中取出，然后放入0 ℃的mWM溶液中，反复清洗，除去冻存保护剂和蔗糖溶液。

将复苏的卵巢放入0 ℃的新鲜含10％ 胎牛血清的1640基础培养液中备用。