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冻存胚胎、精子、卵巢的复苏

相关实验:大鼠胚胎、配子和卵巢冻存技术

最新修订时间:

简介

冻存(cryopreservation)是生物材料保存的主要方法之一。利用冻存技术将胚胎、配子或卵巢置于-196 ℃液氮中低温保存,可以使胚胎、配子或卵巢暂时脱离生长状态而将其生理特性保存起来,这样在需要的时候再复苏用于实验。


适度地保存一定量的胚胎、配子或卵巢,可以防止因意外事件而造成丢种,起到了胚胎、配子或卵巢的保种作用。


除此之外,还可以利用冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些特殊基因型的胚胎、配子或卵巢。


材料与仪器

器材:


①移液器
②无菌移液枪、枪头

③37 ℃ 5% 的CO2培养箱


试剂:


①0.25 mol/L的蔗糖溶液
②mWM溶液
③含10% 胎牛血清的1640基础培养液

步骤

冻存胚胎、精子、卵巢复苏的基本过程如下:


1.冻存胚胎的复苏 从液氮中取出胚胎冻存管,室温放置30秒;用移液器吸取预热到37 ℃的0.25 mol/L的蔗糖溶液0.9 ml,加入冻存管内;迅速来回吹吸约10次,回收胚胎。


用新鲜的含10% 胎牛血清的1640基础培养液洗涤3次;镜下检查形态正常的胚胎。


2.冻存精子的复苏 从液氮中取出精子冻存的麦管,室温停留10秒;立即投入37 ℃水浴中解冻10~15分钟;离心去除冻存保护剂;将复苏的精子移入已经预先预热好的获能液滴中;37℃ 5% 的CO2培养箱中获能30~60分钟。


3.冻存卵巢的复苏 将冻存管从液氮中取出;加入37 ℃的0.25 mol/L的蔗糖溶液,反复吹打数次,加速卵巢的复苏;将复苏的卵巢从0.25 mol/L的蔗糖溶液中取出,然后放入0 ℃的mWM溶液中,反复清洗,除去冻存保护剂和蔗糖溶液。


将复苏的卵巢放入0 ℃的新鲜含10% 胎牛血清的1640基础培养液中备用。

来源:丁香实验

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