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大鼠精子冻存保存方法

相关实验:大鼠胚胎、配子和卵巢冻存技术

最新修订时间:

简介

冻存(cryopreservation)是生物材料保存的主要方法之一。利用冻存技术将胚胎、配子或卵巢置于-196 ℃液氮中低温保存,可以使胚胎、配子或卵巢暂时脱离生长状态而将其生理特性保存起来,这样在需要的时候再复苏用于实验。


适度地保存一定量的胚胎、配子或卵巢,可以防止因意外事件而造成丢种,起到了胚胎、配子或卵巢的保种作用。


除此之外,还可以利用冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些特殊基因型的胚胎、配子或卵巢。

材料与仪器

器材:


①冻存管
②无菌移液枪、枪头
③超低温冰箱
④CO2、37 ℃恒温箱

⑤程序降温仪(KRY010,Planer,英国)


试剂:


①材料:雄鼠
②Tes、Tris、PBS
③葡萄糖、卵黄、十二烷基硫酸钠(SDS)
④液氮
⑤甘油

步骤

大鼠精子冻存的基本过程可分为如下几步:


1.取精子 。


2.配制精子冻存保护液(表4-6-1),37 ℃预热。
成分 浓度 成分 浓度
Tes 21.07 mmol/L 卵黄 25%
Tris 9.49 mmol/L 十二烷基硫酸钠(SDS) 0.1%

葡萄糖 2.22 mmol/L 甘油 5%


3.取3月龄以上有繁育能力的雄鼠,颈椎脱臼处死。


4.腹部75% 乙醇消毒,打开腹腔,取附睾尾。


5.在磷酸盐缓冲液(PBS)中简单漂洗2次,去除血细胞后置于1 ml冻存保护液中。


6.用眼科剪剪3刀,5% CO2、37 ℃恒温箱中孵育10分钟,使精子游出;将精子装入麦管,准备冻存。


7.利用程序降温仪(KRY010,Planer,英国)进行程序冻存,起始温度为20 ℃;以3 ℃/min的速率降至4 ℃,平衡3分钟;5 ℃/min降至-4 ℃;10 ℃/min降至-30 ℃;20 ℃/min降至-80 ℃,平衡10分钟;投入液氮。

来源:丁香实验

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