简介
冻存（cryopreservation）是生物材料保存的主要方法之一。利用冻存技术将胚胎、配子或卵巢置于-196 ℃液氮中低温保存，可以使胚胎、配子或卵巢暂时脱离生长状态而将其生理特性保存起来，这样在需要的时候再复苏用于实验。
适度地保存一定量的胚胎、配子或卵巢，可以防止因意外事件而造成丢种，起到了胚胎、配子或卵巢的保种作用。
除此之外，还可以利用冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些特殊基因型的胚胎、配子或卵巢。
材料与仪器
器材：
①冻存管
②无菌移液枪、枪头
③超低温冰箱
④CO2、37 ℃恒温箱
⑤程序降温仪（KRY010，Planer，英国）
试剂：
①材料：雄鼠
②Tes、Tris、PBS
③葡萄糖、卵黄、十二烷基硫酸钠（SDS）
④液氮
⑤甘油
步骤
大鼠精子冻存的基本过程可分为如下几步：
1．取精子 。
2．配制精子冻存保护液（表4-6-1），37 ℃预热。
成分 浓度 成分 浓度
Tes 21.07 mmol/L 卵黄 25%
Tris 9.49 mmol/L 十二烷基硫酸钠（SDS） 0.1%
葡萄糖 2.22 mmol/L 甘油 5%
3．取3月龄以上有繁育能力的雄鼠，颈椎脱臼处死。
4．腹部75％ 乙醇消毒，打开腹腔，取附睾尾。
5．在磷酸盐缓冲液（PBS）中简单漂洗2次，去除血细胞后置于1 ml冻存保护液中。
6．用眼科剪剪3刀，5％ CO2、37 ℃恒温箱中孵育10分钟，使精子游出；将精子装入麦管，准备冻存。
7.利用程序降温仪（KRY010，Planer，英国）进行程序冻存，起始温度为20 ℃；以3 ℃／min的速率降至4 ℃，平衡3分钟；5 ℃／min降至-4 ℃；10 ℃／min降至-30 ℃；20 ℃／min降至-80 ℃，平衡10分钟；投入液氮。
来源：丁香实验
