简介
冻存(cryopreservation)是生物材料保存的主要方法之一。利用冻存技术将胚胎、配子或卵巢置于-196℃液氮中低温保存,可以使胚胎、配子或卵巢暂时脱离生长状态而将其生理特性保存起来,这样在需要的时候再复苏用于实验。适度地保存一定量的胚胎、配子或卵巢,可以防止因意外事件而造成丢种,起到了胚胎、配子或卵巢的保种作用。除此之外,还可以利用冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些特殊基因型的胚胎、配子或卵巢。
材料与仪器
器材:
①冻存管
②无菌移液枪、枪头
③超低温冰箱
试剂:
①材料:大鼠胚胎
②DMSO
③DAP213溶液
④液氮
步骤
大鼠胚胎冻存的基本过程可分为如下几步:
1.将形态正常的大鼠胚胎移入1 mol/L的DMSO液滴中,每个液滴转移40~50个胚胎,让其自然沉降到液滴底部。
2. 再用10 μl的移液器吸取5 μl含有全部胚胎的DMSO,转移到冻存管内。
3. 在0 ℃恒温器中平衡5分钟;加入DAP213溶液,继续在0 ℃条件下平衡5分钟。
4. 投入液氮保存。
来源:丁香实验