Langendorff离体心脏缺血再灌注方案

采用美国Radnoti公司Langendorff离体心脏灌流系统，观察离体心脏功能变化，可排除其它组织器官、循环代谢产物的干扰。
实验步骤：
A.  配制37℃ K-H液（1.25 CaCl2，130 NaCl，5.4 KCl，11 葡萄糖，0.5 MgCl2，0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3），向K-H液中通入95％O2-5% CO2气体，缓冲液PH 值为7.4，并取部分K-H液放入冰箱中，使其温度降到4℃。
B.  清洁Langendorff管路，每次使用前先用1000ml蒸馏水冲洗，打开水浴循环，再用K-H液将整个管路系统进行冲洗。
C.  鲁米钠腹腔注射麻醉动物（100mg/kg），并向肝静脉注射100IU肝素，颈动脉放血处死动物，同时快速分离心脏，放入4℃K-H液中挤净血液并称重。
D.  将心脏迅速固定在Langendorff 灌流系统中，通过主动脉以85cmH2O压力逆行灌注，通过肺静脉插入导管至左心房。
E.  心脏复跳后，将一个球囊插入心脏左心室，球囊和压力换能器相连，在电脑上记录左室内压，调整左室舒张内压（LVEDP）在4～10mmHg之间。待心脏左室收缩压（LVESP）稳定后且大于80mmHg，心率大于200次/分，可继续实验，并记录心电图（ECG）、主动脉流量（AF）、冠脉流量（CF）、左室收缩末压（LVESP）等指标。
F.  缺血再灌注方案：关闭灌流液，停灌心脏45min后，打开灌流液进行复灌90min（复灌起始15min通过肺静脉给予一定的压力辅助），同时记录相关指标。
G.  实验结束后，用蒸馏水冲洗整个管路系统，防止K-H液残留在管路中。