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蟾蜍离体心脏灌流

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2861

[目的要求]

1 学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。

2 了解心肌的生理特征。

3 观察N a + 、K + 、C a + 及肾上腺素(Adr)、乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。

[基本原理]

心脏具有自动节律性收缩的特性,可用于人工灌流的方法,研究心脏活动的规律及特点;还可观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。

[动物与器械]

蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、生物机能实验系统、张力传感器、滴管、培养皿、纱布、棉线、任氏液、0.65%N a CI、5%N a CI、2%C a CI 2 、1%KCI、1:5000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、300U/ml肝素

[方法与步骤]

1、 仪器 准备

打开 生物 机能试验系统,接通张力传感器输入通道。选择“蛙心灌流”实验。

2、离体蛙心的制备

取一只蟾蜍,双毁髓后背位置于蜡盘中,安上次实验方法暴露心脏仔细识别心脏周围的大血管((图)。 在左主动脉下方穿一线,于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线,并打一活结备用。 左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方, 沿向心方向将动脉上壁剪一斜口 。选择大小适宜的蛙心套管,然后将盛有少量(套管内2~3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管,又开口处插入动脉圆锥(图)当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后腿, 使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)此时可见套管中血液冲入套管,并使液面随心脏搏动而上下移动,表明操作成功(否则需退回并重新插入) 。用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后, 轻轻提起备用线,将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)再将结线固定在套管的小玻璃钩上,然后剪断结线上方的血管 。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织,仅保留静脉窦与心脏的联系,使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.5~2cm),即可进行实验。

3、将插好离体心脏的套管固定在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可加得过多,以免因夹破心室而漏夜)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。

注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。

4、实验观察

(1)记录正常心搏曲线。

(2)改用0.65%N a CI溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线出现明显变化时,立即吸取套管中的灌流液,并做好冲洗标记,迅速用新鲜任氏液清洗2~3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管,以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同)。

(3)向套管内加2~6滴5%N a CI(较细的套管需少加)溶液,并作好加药标记,观察心搏曲线的频率即振幅变化。当曲线出现明显变化时,立即吸取套管中的灌流液,并做好冲洗标记,迅速用新鲜任氏液清洗2~3次,待心搏恢复正常。

(4)同法向套管内加入1~3滴2%C a CI 2 溶液,观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时,立即更换任氏液,待心搏恢复正常(如果恢复迟缓,可多次冲洗)。

(5)向套管内加1~2滴1%KCI溶液,记录心搏曲线变化。当心搏曲线变化时,同法更换灌流液,待心搏恢复正常。

(6)同法记录套管中加入1~2滴的肾上腺素溶液(1:5000)后心搏曲线的变化。

(7)同法记录套管中加入1~2滴乙酰胆碱溶液(1:10000)后心搏曲线的变化。

5、整理记录,并将测量的心搏曲线数据填在图的下方。

[思考题]

1、本实验说明心肌的哪些生理特性?

2、用实验说明内环境相对恒定的重要意义。

3、试分析任氏液中的钠离子、钙离子与钾离子对心肌的作用。

4、为何强调实验中保持灌流液面的恒定?灌流量对心脏活动会有什么影响?

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