蟾蜍离体心脏灌流

[目的要求]

1 学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。

2 了解心肌的生理特征。

3 观察N _a ⁺ 、K ⁺ 、C _a ⁺ 及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）等对离体心脏活动的影响。

[基本原理]

心脏具有自动节律性收缩的特性，可用于人工灌流的方法，研究心脏活动的规律及特点；还可观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。

[动物与器械]

蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、生物机能实验系统、张力传感器、滴管、培养皿、纱布、棉线、任氏液、0.65%N _a CI、5%N _a CI、2%C _a CI ₂ 、1%KCI、1：5000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱、300U/ml肝素

[方法与步骤]

1、 仪器 准备

打开 生物 机能试验系统，接通张力传感器输入通道。选择“蛙心灌流”实验。

2、离体蛙心的制备

取一只蟾蜍，双毁髓后背位置于蜡盘中，安上次实验方法暴露心脏仔细识别心脏周围的大血管（（图）。 在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎（动物个体小时，结扎位置可靠上些）。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。 左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方， 沿向心方向将动脉上壁剪一斜口 。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量（套管内2～3cm高度）任氏液（内加入一滴肝素溶液）的斯氏蛙心套管，又开口处插入动脉圆锥（图）当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后腿， 使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口） 。 此时可见套管中血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功（否则需退回并重新插入） 。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后， 轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧（不得漏液） ， 再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结线上方的血管 。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体（切勿损伤静脉窦）。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（1.5～2cm），即可进行实验。

3、将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉（不可加得过多，以免因夹破心室而漏夜）。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。

注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。

4、实验观察

（1）记录正常心搏曲线。

（2）改用0.65%N _a CI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸取套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致（以下同）。

（3）向套管内加2～6滴5%N _a CI（较细的套管需少加）溶液，并作好加药标记，观察心搏曲线的频率即振幅变化。当曲线出现明显变化时，立即吸取套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常。

（4）同法向套管内加入1～3滴2%C _a CI ₂ 溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常（如果恢复迟缓，可多次冲洗）。

（5）向套管内加1～2滴1%KCI溶液，记录心搏曲线变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。

（6）同法记录套管中加入1～2滴的肾上腺素溶液（1：5000）后心搏曲线的变化。

（7）同法记录套管中加入1～2滴乙酰胆碱溶液（1：10000）后心搏曲线的变化。

5、整理记录，并将测量的心搏曲线数据填在图的下方。

[思考题]

1、本实验说明心肌的哪些生理特性？

2、用实验说明内环境相对恒定的重要意义。

3、试分析任氏液中的钠离子、钙离子与钾离子对心肌的作用。

4、为何强调实验中保持灌流液面的恒定？灌流量对心脏活动会有什么影响？