小鼠离体心脏灌流技术

小鼠离体心脏灌流是一种常用的生理学实验，用于评估小鼠心脏的生理功能和药物效应。实验通过将小鼠心脏从体内取出并灌注生理盐水，模拟体内环境，以评估心脏的收缩和舒张功能。

离体心脏灌流的原理基于心脏的生理功能和血液循环。在实验中，将小鼠心脏从体内取出并通过大血管进行逆行灌流，即将灌流液从主动脉灌流入冠脉循环，灌流过程中可以通过调整灌流液的组成和流速等参数，来评估心脏对不同药物和刺激的反应。

小鼠离体心脏灌流可用于评估小鼠心脏的生理功能和药物效应，并研究与之相关的生理学和病理学问题，广泛应用于心脏生理、病理生理、生化代谢、药物研究等许多方面。例如，可以用离体心脏灌流来评估心血管疾病、药物对心脏功能的影响等。

手术器械一套，注射器，针头，线绳，鼠手术台，灌流液瓶，心脏 Langendorff 法灌流装置，恒温循环器，滑轮，烧杯，量筒，修正洛氏液，1:10 000 肾上腺素，1:10 000 乙酰胆碱。心电图记录仪、记录表格。

1、准备

准备实验设备，包括离体心脏灌流装置、心电图记录仪等。

2、摘取心脏

小鼠腹腔注射肝素（0.4 ml/100 g）抗凝，30 min 后，小鼠腹腔注射 20% 氨基甲酸乙酯（3 ml/kg），麻醉后将小鼠仰卧位固定于手术台上。迅速沿胸前壁正中剪开皮肤，打开胸腔，轻轻提起心脏，小心剪断腔静脉、主动脉及心脏周围组织，迅速将心脏连同一段主动脉取出。手术过程中注意不要损伤心脏，主动脉根部要留 0.5~1 cm 长度以备插管用。心脏取出后立刻置于预先备好的充氧的冷克氏液（4 ℃ 左右）中，用手指轻压心室以利于残留在心脏中的血液排出，防止凝血块形成。心脏停跳后，迅速剪开心包膜并剪去心脏周围的组织（包括肺组织、气管以及附着于心脏上的其他组织），认清主动脉、腔静脉及肺动脉的解剖位置，在主动脉根部穿一棉线备用。

3、灌流心脏

将主动脉套进心脏插管口内，用棉线将主动脉和心脏插管结扎在一起并固定。插管进入主动脉不宜过深，以免损伤主动脉瓣及堵住冠状动脉开口，影响冠状血管的灌流。心脏经充氧的温修正洛氏液灌流后，在 1 min 内即可开始恢复跳动，但起初心率较慢，并常有心律不齐，以后逐渐变快而且心律也逐步恢复正常和稳定，可维持数小时。

4、记录

设置仪器参数，在心脏灌流过程中，通过心电图记录仪监测心脏的电信号变化，以评估心脏的收缩和舒张功能。调节固定保温灌流槽，使保温灌流槽罩住心脏。灌流液进入冠状血管后到右心房经腔静脉及肺动脉滴入双层灌流槽中，经槽底部的漏斗形开口流出，用量筒收集一定时间内的流出液即为冠脉流量。

在灌流过程中，可以加入不同的药物或刺激剂（肾上腺素溶液/乙酰胆碱溶液），以评估心脏对其的反应。

5、分析

分析实验结果，评估小鼠心脏的生理功能和药物效应。

1. 在进行实验前，需要对实验设备进行充分的清洗和消毒，以避免对实验结果的影响。

2. 在实验中，应注意小鼠的健康状况和心脏的完整性，及时记录并处理异常情况。

3. 在实验中，应注意控制实验条件的一致性，如灌流液的组成和流速等参数，以保证实验结果的可比性和可重复性。

4. 在进行心电图记录时，应注意信号的稳定性和准确性，并根据需要进行滤波和放大处理。

5. 在实验过程中，应注意环境的温度和湿度等条件，以保证灌流液的温度和心脏的正常功能。

6. 在加入药物或刺激剂时，应注意剂量和浓度的控制，以避免对心脏造成过度刺激或损伤。

7. 在分析实验结果时，应注意考虑实验过程中的多种因素，如小鼠品种、年龄、性别、饮食和环境等，以充分评估实验结果的可靠性和实用性。

8. 离体小鼠心脏灌流是一项复杂的实验，需要有一定的专业知识和技能，同时需要进行充分的实验设计和控制，以确保实验的可重复性和准确性。