🔥 脑缺血再灌注实验（MCAO）

中风是全世界最常见的致命性神经疾病。而大多数的中风（88%）是由脑血管阻塞引起的（缺血性中风）。由于大多数缺血性中风（约 80%）发生在大脑中动脉（MCA）区域，因此动物中风模型大多集中在该动脉中。

研究中风时可采用的一种动物模型。该技术可以构建永久性梗阻或短暂的梗阻。如果在一定时间间隔（30 min，1 h，2 h）后拔出线栓缝合，则实现再灌注（短暂 MCAO）；如果线栓保持原位（24 h），则用于永久性的大脑中动脉闭塞模型（永久 MCAO）。

显微镜（小鼠需要），血管夹，尖头直镊，尖头弯镊，显微剪，缝合线，缝合针，线栓，棉球，75% 酒精，生理盐水，电凝笔，动物加热垫，电动剃毛器，牵开器。

1.将缝合线切成大约 20mm 长每段，对于体重 25-30g 的小鼠使用直径为 0.21-0.22mm 的缝合线。

2.高压灭菌手术器械，75% 酒精擦拭手术台和相关设备进行消毒。

3. 采用气体麻醉（异氟烷），将鼠置于仰卧位，放在加热垫上，检测体温在 36.5-37.5°C 之间。

4.使用电动剃毛器将颈部的毛发剔除，暴露皮肤。用 75% 酒精消毒手术部位三次。

5.在立体解剖显微镜下，在颈部开一个 1cm 长的中线切口，使用牵开器暴露手术区域，并识别右侧颈总动脉（CCA），颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。仔细分离动脉，使其脱离周围神经和筋膜。进一步将 ECA 和甲状腺上动脉（STA）分支用电凝笔凝固。在凝固段切断 ECA 和 STA。

6.在 ECA 残端周围系两个活结，在 CCA 分叉处用血管夹夹住 ECA 和 ICA。

7.用显微剪在 ECA 的两个活结中间开一个小切口，将线栓插入，然后移动到夹子上，系紧两个活结但线栓可以移动

8.将夹子取下，将线栓从 ECA 的管腔轻轻推入 ICA，进入的长度距离 CCA 的分叉处 9-10mm（小鼠），以阻断 MCA。

9.若需要短暂的 MCAO，则此时将小鼠伤口处放上生理盐水浸湿的棉球，放在温暖的环境下，根据个人实验需求梗死不同时间，时间到后，拔出线栓，缝合伤口即可。

图片引自：
Azedi, F., Mehrpour, M., Kazemnejad, S., Mousavizadeh, K., Zarnani, A. H. and Joghataei, M. T. (2019). Intra-arterial Drug Delivery to the Ischemic Brain in Rat Middle Cerebral Artery Occlusion Model. Bio-protocol 9(23): e3438. DOI: 10.21769/BioProtoc.3438.

1.分离动脉时要轻柔，很容易将动脉弄破造成大出血，导致动物死亡。

2.线栓插进去的深度距离 CCA 的分叉处小鼠一般为 9-10mm，若插入深度不够可能导致无法梗死模型失败，插入过深可能导致蛛网膜下腔出血造成动物死亡。

1. MCAO 模型死亡率过高？

答：此模型造模过程对动物体温的要求极高，一定要保证动物的体温在 36.5-37.5°C 之间，这样动物才可能顶过如此大的创伤。

2. MCAO 模型后动物行为无明显变化？

答：可能是造模失败，线栓插入的深度不够，或者插入过深，错过 MCA 的分叉口，没有堵塞 MCA。