动物染色体标本的制备

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一、实验目的
1. 了解染色体 标本制备的基本原理
2. 掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤
二、实验原理
每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。
三、实验用品
器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管
试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8磷酸缓冲液 、Giemsa染色液
材料：蟾蜍
四、实验方法步骤
1. 前处理 实验前3－4小时，按每克体重3ug剂量给蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；
2. 取材 打开蟾蜍腹腔，截取1－2cm长的一段小肠（以十二直肠为好），用见到剖开成片状，在生理盐水中洗净；
3. 低渗 将洗净的小肠投入到盛有5mL低渗液的小试管中，在37℃水浴下处理30分钟以上；
4. 固定 弃去低渗液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液约5ml，静止固定40分钟左右；
5. 解离 弃去固定液，加入约2ml60％的冰乙酸，轻轻摇动，使解离的细胞充分散开，5分钟后弃去小肠，即得细胞悬浮液；
6. 滴片 吸取少许细胞悬浮液，在适当的高度滴3－4滴于冰冷的载片上，迅速吹斜气；
7. 干燥 滴片自然风干或吹风机吹干；
8. 染色 在载片上滴十滴磷酸缓冲液，再滴一滴Giemsa染液，橡皮球轻轻吹均匀，染色30分钟左右；
9. 观察 吹干后在显微镜下观察。
五、实验报告
1. 简述染色体标本制备的方法步骤
2. 制备理想的染色体标本，应注意哪些关键步骤？