原理
在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素，破坏细胞纺锤体的形成，使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞，低渗处理，使细胞胀大，染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质，使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片，然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。
材料与仪器
HeLa细胞
640培养液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸缓冲液 生理盐水
超净台 镊子 离心机 水浴箱 天平 离心管 显微镜 载玻片 平皿
640培养液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸缓冲液 生理盐水
超净台 镊子 离心机 水浴箱 天平 离心管 显微镜 载玻片 平皿
步骤
1. 微量全血细胞培养至68小时左右，用1 ml 注射器号针头向每个5 ml 培养瓶内加2滴秋水仙素溶液。
2. 摇匀后继续培养3小时，此项操作不需要严格无菌。
2. 摇匀后继续培养3小时，此项操作不需要严格无菌。
3. 按时终止培养，用吸管温和吹打成细胞悬液后，移至10 ml 离心管中。
4. 用天平平衡后以1000 rpm 离心8分钟，弃大部上清，剩0.5 ml。
5. 再吹打成细胞悬液，加入预热37℃的 0.075 mol/L 的KCL溶液9 ml，置37℃水浴中低渗处理30分钟（这期间配制3：1甲醇一冰醋酸固定液）。
6. 向离心管中加入1 ml 固定液预固定。平衡后以1000 rpm 离心8分钟，同样剩 0.5 ml 上清。
7. 轻轻将细胞吹成悬液，加5~6 ml 固定液，室温下固定30分钟。然后离心，弃上清，重复固定一次。
8. 再离心，留0.1~0.2 ml 上清，吹打成细胞悬液。
9. 吸取1~2滴悬液，在距载片约15 cm 高度滴于预冷的干净载玻片上，迅速对准细胞吹气促进染色体分散。
11. 将标本面朝下放在染色槽中，加入染液染10分钟，自来水冲洗，晾干后观察。
12. 低倍镜下，制片质量较好的标本上可看到有较多的分裂相，染色体之间分散良好，互不重叠。
13. 油镜下观察可见每一条染色体都含有两条染色单体，两条单体由着丝粒相结。
14. 分区计数染色体数目并判定性别，或拍照后进行核型分析。
来源：丁香实验
