染色体CBG标本制备

一、原理

异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的，因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近，或在染色体臂上呈现“团块”，这些染色质主要由C显带技术呈现，故称为C带。CBG即C带、Ba（OH）2、Giemsa的简写。

C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA，但在C带区有很强抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可见效果良好的C带。抽取DNA的过程由三个连续操作形成。

首先，酸处理可使DNA脱嘌呤，但未使DNA骨架断裂；其次热碱处理可使DNA变性，促进继发的DNA溶解；最后，热盐溶液使DNA骨架断开并使碎片溶解进入溶液中。因此，最终以Giemsa染料显示出DNA的不同分布。在优良的C带标本中，常染色质只呈现中期染色体的一般外貌，结构异染色质区着色很深。

C带在检查1、9、16特别是Y染色体的异质区时尤为重要。

二、用品和试剂

0.2N HCl，5% Ba（OH）2，2×SSC，Giemsa染色液。恒温水浴箱，染色缸。其余同外周血染色体制备。

三、操作步骤

（一）方法一

1. 酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2N HCl（室温）处理15-30分钟。水洗。

2. 碱处理：浸入已预温至56℃的5% Ba（OH）2水溶液10分钟。水洗。

3. 热盐处理：置2×SSC溶液（67℃）处理60-90分钟。水洗。

4. 染色：l∶10 Giemsa染色液染色10-5分钟。水洗。气干。

5. 镜检。

（二）方法二

1. 酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2N HCl（室温）处理60分钟。水洗。

2. 碱处理：浸入1% Ba（OH）2水溶液（50℃）中15-20秒。水洗。

3. 热盐处理：置2×SSC溶液（60℃）90分钟。水洗三次。

4. 染色：l∶10 Giemsa染色液染色10分钟。水洗。气干。

5. 镜检。