免疫荧光样品制备与观察

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一、原理
（一）什么是荧光，简单地讲，当用一定波长的光（如紫外光）照射某种物质时，经过照射的物质在极短时间内即可发射出一种可见的光，这种光即为荧光。
在生物中，由于产生荧光的方式不同，可以概括地归纳为以下几种：
1．自发荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光的称为自发荧光（或直接荧光）。如植物 组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。
2．次生荧光：有些生物组织经紫外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，这种称为次生荧光（或间接荧光）。如吖啶橙，DAPI均可检测细胞内的核酸。
3．免疫荧光：这种染色法是利用抗原 与抗体反应的原理，将荧光染料与抗体结合，然后，将这种标记荧光染料的抗体再与相应抗原结合，即形成抗原、抗体复合物。经一定波长的光激发后，即可发射出荧光，以此辨认抗原在组织细胞内的分布状况。这种方法被称为免疫荧光（或荧光抗体法）。
组织和细胞中所产生的荧光，须借助荧光显微镜 方可进行观察，本实验是用普通显微镜配以一种轻便的荧光光源观察荧光现象。

（二）轻便落射光装置
落射光装置的组成：此装置是为普通显微镜配套设计的。它是由两部分组成，一为光源；另一为落射光系统，如图，落射光系统由激发滤片组成。当光线通过激发滤片到达二向分光镜时，使激发光反射，经物镜后，激发标本，标本辐射荧光，又通过物镜，分光镜而到达目镜，以供观察者观察及记录。
二、目的与要求
初步了解生物荧光及荧光染色法，学习几种生物荧光标本的制作与观察。

三、实验内容
（一）生物自发荧光的观察
（二）生物的荧光染色法
（三）荧光抗体法

四、实验步骤
（一）生物自发荧光的观察
1. 制片
（1）取一干净载玻片
（2）用吸管吸取眼虫培养物，滴于载玻片的中央位置。
（3）用镊子取一张盖玻片，沿液体的边缘轻轻的盖上盖玻片。