细胞组分的分析方法――定量细胞化学分析技术
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1.概述
流式细胞光度计(flow cytometry)可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量，特别是它还可将某一特异染色的细胞从数以万计的细胞群体中分离出来，以及将DNA含量不同的中期染色体分离出来，因此近年来得到越来越广泛的应用。
2.工作原理
流式细胞光度计(简称FCM)是将流体喷射技术、激光技术、空气计数、γ―射线能谱术
及电子计算机等新技术与显微荧光分光光度计密切结合的高度精密仪器。在电子计算机操作 程序控制下能灵敏而快速地对大量单细胞样品进行多信息分析与测定。目前，FCM技术已广泛地应用于生命大分子物质的定量、细胞周期分析、细胞表面抗原、受体、染色体、核浆比例、活细胞分类等细胞生物学各领域的研究工作中。
3.FCM系统调试：
以FACS-Ⅲ型机为例，调试的原则是：得到较高的分辨率，即对某一特殊样品测得的变 化常数CV值，CV值越小越好。得到较高的灵敏度，即可测出最小荧光分子数。
4.样品制备过程
着重介绍单细胞悬液的制备方法，这是生物学工作者最为关心的问题。悬液培养样品或 各种腹水细胞本身就是单细胞悬液，可直接使用。下面介绍单层培养样品及实体组织的制备方法。
(1)单层培养的样品：器材和试剂：玻璃滴管数只(灭菌)；5ml移液管5只(灭菌)；10ml移液管3只(灭菌)；离心管数只(灭菌)；灭菌超净台；恒温水浴箱；离心机、冰箱；PBS液(灭菌)；胰蛋白酶溶液。
(2)实体组织：器材和试剂：眼科剪、眼科镊各一把；50ml小烧杯数个；玻璃滴管数只；小块双层纱布；普通光学显微镜；恒温水浴箱；离心机；Hank’s平衡盐水；分离液；中和液。
对于不同组织，酶用量和pH均可改变。除胰蛋白酶外，还可以用胶原酶、胰肽酶E、透明质酸酶或联合使用。
器材和试剂：薄刀片；10ml移液管2只；玻璃滴管数只；带22号针头的注射器1个；磷酸缓冲液；蔗糖-盐溶液；TPB分离液。
步骤：①将肝组织切成3―5ml的薄片；②加10mlTPB分离液；③冰浴1―2小时，并用滴管上下吹打数次；④将细胞液通过一22号针头，形成单细胞，⑤250g离心5分钟，并以生理盐水洗2次去掉分离液。
被分离的肝细胞数目随TPB浓度的增加而增加，其最适浓度范围是每升10的负5次方至10的负2次方摩尔。
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