原理
材料与仪器
组织样品
DAB MnCl2 Tris CaCl2 KCl NaOH Tris 缓冲液 多聚甲醛 锇酸
DAB MnCl2 Tris CaCl2 KCl NaOH Tris 缓冲液 多聚甲醛 锇酸
步骤
1. 组织取材后，即放入孵育液中，孵育 5 min。孵育液配方如下：DAB 2.5 mmol/L， MnCl2 0.5 mmol/L，Tris 4 mmol/L，CaCl2 2 mmol/L，KCl 4 mmol/L，pH 7.2～7.4，用 NaOH 调。
2. Tris 缓冲液漂洗。
3. 4％ 多聚甲醛固定、漂洗。
4. 锇酸后固定、脱水等同常规。
注意事项
1. 由于氧自由基化学性质非常活泼，因此组织取材后应迅速与孵育液反应，孵育后再固定，不能先固定。
2. 关于铈生理溶液的配制，由于铈可与多种物质产生沉淀，如磷酸根离子、碳酸根离子，因此配制时需小心，一般可用生理盐水或葡萄糖等配制。另外，关于pH问题，虽然反应液越接近中性越好，但用三氯化铈配制时偏酸，而且不能用 NaOH 来调整，因为会形成沉淀。
3. 动物实验通常用灌注方法，以便及时与氧自由基反应，可取得较为满意的效果。
4. 孵育液使用前吹氧，实验较易成功。
来源：丁香实验
