自由基显示实验

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

氧自由基主要指 O₂^-• 、•OH ，H₂O₂ 虽不属于氧自由基，但与氧自由基有密切关系（如其他氧自由基可转化为 H₂O₂，H₂O₂ 也可氧化组织，使其发生损伤），因此讨论氧自由基时常把其包括在内。H₂O₂ 可与铈离子反应形成沉淀：H₂O₂+Ce³⁺→Ce（OH）₂OOH 或 Ce（OH）₃OOH，O₂^-• 在有 Mn²⁺ 存在的情况下，与DAB（四盐酸-3，3-二氨基联苯胺）反应，形成嗜锇物质。因此通过铈或 Mn²⁺、DAB 反应，可在电子显微镜下定位氧自由基产生情况。

来源：《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

H2O2细胞化学法

1. 组织取下后，立即在含 1 mmol/L 铈生理溶液中切成小块，孵育 5 min。2. 生理溶液漂洗 5 min。3. 4％多聚甲醛固定、漂洗。4. 锇酸后固定、脱水、包埋等同常规。5. 电镜观察。

细胞化学法

1. 组织取材后，即放入孵育液中，孵育 5 min。孵育液配方如下：DAB 2.5 mmol/L， MnCl2 0.5 mmol/L，Tris 4 mmol/L，CaCl2 2 mmol/L，KCl 4 mmol/L，pH 7.2～7.4，用 NaOH 调。2. Tris 缓冲液漂洗。3. 4％多聚甲醛固定、漂洗。4. 锇酸后固定、脱水等同常规。