放射免疫分析技术

别名：radioimmunoassay，RIA

最新修订时间：2022-02-10

简介

放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是经典的放射免疫标记技术。1960 年首先由 Yalow 和 Berson 建立了血浆胰岛素的放射免疫分析法。随后 Ekins 又报道了甲状腺激素的竞争性蛋白结合分析法。此类技术具有样品用量小、高敏感度（pg/ml）等优点，广泛用于激素、神经肽等测量方面。

原理

放射免疫分析属于竞争性饱和分析技术，基本原理是在一定的反应体系内，某种被检测的微量抗原（Ag），及标记有放射性同位素 ¹²⁵I 的该种抗原物质（Aundefined）共同与有限量的抗体（Ab）竞争性结合，形成免疫复合物 Ag-Ab 和 Aundefined-Ab，其反应遵循质量作用定律。当反应系统中 Aundefined 和 Ab 的量固定时，若 Ag 量愈多，则形成 Ag-Ab 亦多，而 Aundefined-Ab 则愈少，反之亦然，其反应式如下：

若向一系列反应管中分别加入定量的 Ab 和 Aundefined，同时加入不同量的未标记的标准 Ag，当反应达到平衡以后，用一定的方法分离 Aundefined与 Aundefined-Ab，然后测定 Aundefined 或 Aundefined-Ab 的放射性强度（通常以每分钟计数率 cpm 值表示），就可得出一条剂量反应曲线，即标准曲线。绘制标准曲线时，一般以加入标准 Ag 的量为横坐标，以 B/B。（B 为含标准 Ag 管的 Aundefined-Ab 放射计数率，B。为标准 Ag 为 0 时的最大 Aundefined-Ab 放射计数率）或 B/T（T 为每管加入的 Aundefined 总放射计数率）为纵坐标绘制曲线。将测定的未知样品的放射性，与标准曲线比对，即可读取测定样品的 Ag 含量。

用途

放射免疫分析技术常用于激素、神经肽等的测量。

材料与仪器

试剂：

Iodogen、Na¹²⁵I、人激活素 A（Activin A，Act），兔抗人 Activin A 多克隆抗体（Anti-FS）、羊抗兔 IgG（GAR）、0.05 mol/L pH7.5 磷酸缓冲液（PB）、磷酸盐缓冲液（PBS）

仪器：

Sephadex G25 层析柱、水浴锅等

步骤

以人激活素 A 放射免疫分析为例，其基本过程如下：

Activin A 放射免疫分析过程按表 3-1 操作：

Activin A 放射免疫分析的标准曲线和交叉反应曲线见图 3-6。放射免疫测定中，一般要求非特异结合小于总放射计数率的 10%，批间变异系数 CV ＜ 10%，组间变异系数 CV ＜ 5%，样品回收率＞ 85%，与相关肽的交叉反应尽可能低于 1%。

来源：丁香实验