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放射免疫分析技术

相关实验: 放射性标记技术

别名:radioimmunoassay,RIA

最新修订时间:

简介

放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是经典的放射免疫标记技术。1960 年首先由 Yalow 和 Berson 建立了血浆胰岛素的放射免疫分析法。随后 Ekins 又报道了甲状腺激素的竞争性蛋白结合分析法。此类技术具有样品用量小、高敏感度(pg/ml)等优点,广泛用于激素、神经肽等测量方面。

原理

放射免疫分析属于竞争性饱和分析技术,基本原理是在一定的反应体系内,某种被检测的微量抗原(Ag),及标记有放射性同位素 125I 的该种抗原物质(Aundefined)共同与有限量的抗体(Ab)竞争性结合,形成免疫复合物 Ag-Ab 和 Aundefined-Ab,其反应遵循质量作用定律。当反应系统中 Aundefined 和 Ab 的量固定时,若 Ag 量愈多,则形成 Ag-Ab 亦多,而 Aundefined-Ab 则愈少,反之亦然,其反应式如下:

若向一系列反应管中分别加入定量的 Ab 和 Aundefined,同时加入不同量的未标记的标准 Ag,当反应达到平衡以后,用一定的方法分离 Aundefined与 Aundefined-Ab,然后测定 Aundefined 或 Aundefined-Ab 的放射性强度(通常以每分钟计数率 cpm 值表示),就可得出一条剂量反应曲线,即标准曲线。绘制标准曲线时,一般以加入标准 Ag 的量为横坐标,以 B/B。(B 为含标准 Ag 管的 Aundefined-Ab 放射计数率,B。为标准 Ag 为 0 时的最大 Aundefined-Ab 放射计数率)或 B/T(T 为每管加入的 Aundefined 总放射计数率)为纵坐标绘制曲线。将测定的未知样品的放射性,与标准曲线比对,即可读取测定样品的 Ag 含量。

用途

放射免疫分析技术常用于激素、神经肽等的测量。

材料与仪器

试剂:

Iodogen、Na125I、人激活素 A(Activin A,Act),兔抗人 Activin A 多克隆抗体(Anti-FS)、羊抗兔 IgG(GAR)、0.05 mol/L pH7.5 磷酸缓冲液(PB)、磷酸盐缓冲液(PBS)

仪器:

Sephadex G25 层析柱、水浴锅等

步骤

以人激活素 A 放射免疫分析为例,其基本过程如下:

Activin A 放射免疫分析过程按表 3-1 操作:
Activin A 放射免疫分析的标准曲线和交叉反应曲线见图 3-6。放射免疫测定中,一般要求非特异结合小于总放射计数率的 10%,批间变异系数 CV < 10%,组间变异系数 CV < 5%,样品回收率> 85%,与相关肽的交叉反应尽可能低于 1%。

来源:丁香实验

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