SDS-PAGE/蛋白转印/western Blot等实验中试剂配制

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1. 1.5 mol/L Tris (PH8.8)1.称量181.7g Tris置于1L烧杯中。2.加入约800 ml去离子水 ，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至8.8。4.定容至1L.5.高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。(参照kara公司Catalog-N1)

2. 1 mol/L Tris (PH6.8)1.称量121.1g Tris置于1L烧杯中。2.加入约800 ml去离子水 ，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。pH值浓HCl6.87.4约70 ml7.6约60 ml8.0约42 ml4.定容至1L.5.高压灭菌后，室温保存。注意：1.溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。(参照kara公司Catalog-N1)

3. 30%丙稀酰胺(100ml)1.称量下列试剂置于烧杯中。丙烯酰胺(Acrylamide)29 g双丙烯酰胺 (BIS)1 g2.加入约60 ml去离子水 ，充分搅拌溶解。3.定容至100 ml, 用0.45 µm滤膜滤去杂质。5.于棕色瓶中4 oC保存。注意：1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。(参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924)

4. 30% SDS1.称量10 g 高纯度(电泳级)的SDS置于100~200 ml烧杯中。2.加入约800 ml去离子水 ，68oC加热溶解。3.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。4.定容至100 ml，室温保存。(参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924)