Western-Blot试剂配制
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（一）母液
1. 1.0mol/L Tris·HCl
Tris (MW121.14) 30.29g
蒸馏水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
PH HCl
7.4 约17ml
7.5 约16m
7.6 约15ml
8.0 约10ml 2. 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF
PMSF 0.174g
异丙醇 100ml
溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。
3. 0.2mol/L NaH 2 PO 3
NaH 2 PO 4 （MW119.98） 12g
蒸馏水至 500ml
溶解后，高压灭菌，室温保存。
4. 0.2mol/LNa 2 HPO 3
Na 2 HPO·12H2O （MW 358.14） 71.6g
蒸馏水至 1000ml
溶解后，高压灭菌，室温保存。
5. 10 ％SDS
SDS 10g
蒸馏水至 100ml
50℃ 水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
6. 10 ％过硫酸胺（AP）
过硫酸胺 0.1g
超纯水 1.0ml
溶解后，4℃保存，保存时间为1周。（可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可）
7. 1.5mol/L Tris·HCl （pH8.8）
Tris (MW121.14) 45.43g
超纯水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。
8. 0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）
Tris (MW121.14) 15.14g
超纯水 200ml
溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。
9. 30 ％(w/v)丙烯酰胺溶液
丙烯酰胺 29g
甲叉双丙烯酰胺 1g
加去离子水，定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0，置棕色瓶中贮存于室温
10. 20 ％Tween20
Tween20 20ml
蒸馏水至 100ml
混匀后4℃保存。
（二）使用液
单去污剂裂解液（PMSF） ：
1mol/L Tris·HCl （pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX-100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方 ：
50 mM Tris-HCl pH 7.4
150 mM NaCl
1 mM PMSF （用前加）
1 mM EDTA
1% Triton x-100
1% 脱氧胆酸钠
0.1% SDS
0.01mol/L PBS （ pH 7.2-7.4）
0.2 mol/L NaH 2 PO3 19ml
0.2 mol/L NaHPO 3 81ml
NaCl 17g
蒸馏水至 2000ml
（如果用TBST进行洗膜的话，其实PBS用得很少，大可不必自己配制，向试剂公司购买20×的PBS浓缩液即可，500ml的浓缩液不到50元，很方便）
G250 考马斯亮蓝溶液 （蛋白定量专用）
考马斯亮蓝G250 100mg
95 ％乙醇 50ml
磷酸 100ml
蒸馏水至 1000ml
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。
0.15 mol/L NaCl
NaCl （MW58.44） 0.877g
蒸馏水至 100 ml
高温灭菌后，室温保存。
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）
BSA 0.1g
0.15 mol/L NaCl 1ml
溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。
还原型 5XSDS 上样缓冲液
0.5 mol/L Tris·HCl （pH6.8） 2.5ml
二硫叔糖醇（DTT，MW154.5） 0.39g
SDS 0.5g
溴酚蓝 0.025g
甘油 2.5ml
混匀后，分装于 1.5ml 离心管中，4℃保存。
电泳液缓冲液
Tris （MW121.14） 3.03g
甘氨酸（MW75.07） 18.77g
SDS 1g
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次。
（电泳液可以回收重复利用，一般将回收的电泳液加入垂直电泳槽的下半部分，上半部分最好使用新鲜的电泳缓冲液）
（可以配制成 10×电泳缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）
转移缓冲液
半干
24mmol/L Tris （ MW ： 121.14 ） 1.4536 g
192mmol/L 甘氨酸（ MW ： 75.07 ） 7.20672 g
20 ％甲醇 100 ml
蒸馏水至 500ml
浸渍（湿转）
48mmol/L Tris 2.375g
39mmol/L 甘氨酸 11.25g
20 ％甲醇 200ml
0.0375 ％ SDS 0.375g
蒸馏水至 1000 ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次（次溶液最好保存在 4 度冰箱，最多使用 5 次左右，不然影响转移效率）。（先用蒸馏水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS，然后再加入甲醇，最后补足液体。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比较困难）
（可以配制成 2×转移缓冲液进行保存，稀释后使用）
10X 丽春红染液
丽春红 S 2g
三氯乙酸 30g
磺基水杨酸 30g
蒸馏水至 100ml
TBS 缓冲液
1 mol/L Tris·HCl （pH7.5） 10ml
NaCl 8.8g
蒸馏水至 1000ml
（可以配制成 10×TBS 缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）
TBST 缓冲液
20 ％Tween20 1.65ml
TBS 700ml
混匀后即可使用，最好现用现配。
封闭液
脱脂奶粉（国产） 5g
TBST 100ml
最好现用现配。
洗脱抗体缓冲液
14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β- 巯基乙醇) 700 μl （通风厨里加）
SDS 2g
0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8） 12.5ml
超纯水至 100ml
配制时，在通风厨内进行。4℃保存。可重复使用 1 次。 （可用可不用）
显影液（5X）
自来水（加热至 50℃） 375ml （以下药品加到温水中）
米吐尔 1.55g
亚硫酸钠（无水） 22.5g
碳酸钠（无水） 33.75g
溴化钾 20.95g
补水至 500ml
配制时，上述药品应逐一加入，待一种试剂溶解后，再加入后一种试剂。4℃保存。使用时
用自来水稀释至 1 倍。
（不需要自己配制，有钱的直接买柯达的显影液，上千；没钱的到专业的照相器材市场购买即可，很便宜，一包 5 毛钱左右）
定影液
自来水（50～60℃） 700ml （以下药品按顺序加入前者溶解后再加后者）
硫代硫酸钠 240g
亚硫酸钠（无水） 15g
冰乙酸 12.6ml
硼酸 7.5g
钾明矾 15g （水温冷至 30℃以下时再加入）
加水定容至 1000ml，室温保存。
（不需要自己配制，有钱的直接买柯达的定影液，上千；没钱的到专业的照相器材市场购买即可，很便宜，一包 5 毛钱左右）
化学发光试剂
分 A 和 B 两种试剂，有钱可以购买 Amersham、Pierce 或者 Santa Cruz 的， 没钱的话国产的也能凑合。
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