目的DNA片段的回收

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【原理】

在构建重组 DNA分子时，为了提高重组效率，载体DNA的酶切片段，特别是两种酶切的载体DNA片段、目的基因酶切的DNA片段等，都需要在酶切后进一步分离、纯化与回收。另外在检测重组DNA的分子杂交技术中，要制备DNA探针，也往往涉及要先分离回收DNA片段。

【操作】

1.酶切之后进行琼脂 糖凝胶电泳,泳毕后在紫外灯下检查目的片段所在位置,并将其凝胶块切下,将凝胶条置于"V"字槽内负极端贮胶室中。

2．将0.undefinedTBE溶液倒入DNA回收槽内,并用长针头向"V"槽管内加满TBE溶液,然后再用长针头向"V"槽管底加入50～100μl高盐洗脱液。

3．在电泳装置中灌入0.undefinedTBE溶液恰好与置胶室中凝胶表面相平,注意不要使TBE溢过中央隔板。

4.接通电源,100V电源洗脱60分钟,(可看见溴酚蓝全部跑进"V"槽内)用紫外灯检查凝胶条中DNA条带是否完全洗脱。

5.放出电泳装置中的TBE溶液,(注意:TBE溶液应底于"V"槽口)先用微量加样器吸出"V"字槽TBE溶液,然后吸出下层含溴酚蓝的高盐洗脱液移至1.5ml小离心管中,加入1倍体积不含RNA酶的TE溶液冲洗"V"槽,合并两次液体。

6.加入2倍体积冰冷无水乙醇,放置5分钟,15000rpm离心5分钟。

7.弃上清,向沉淀中加70%乙醇洗涤,扣干。

8.真空冷冻干燥15分钟,加入undefinedTE液溶解。