DNA目的片段的回收方法

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一、原理

回收目的片段的方法很多，常用的有冻融法，低熔点琼脂 糖法，透析代法、电泳回收法、玻璃孔回收法等。本实验采用电泳回收法。通过特别的 V 形电泳槽 ，将挖出的含有目的片段的凝胶置于 V 形槽前，接通电泳电源， DNA 即进入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可， V 形管较小，回收的 DNA 片段能保持较高的浓度。

二、实验步骤

1. 大量酶切产物的电泳分离：琼脂糖为 0.8 %，选用大型电泳槽及厚梳子，并载低电压下电泳以提高分辨率。

2. 紫外灯下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝胶。

3. 把凝胶片置于特制的 V 型槽平台上，在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 电泳缓冲液(使其刚好淹过胶面)，再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ，接通电源进行电泳。

4. 紫外灯下检测凝胶块是否含有 DNA ，判断 DNA 是否全部进入 V 形管溶液中。

5. 当 DNA 进入 V 形管中，放掉电泳槽中的缓冲液，吸出 V 形管中的溶液。

6. 溶液加两倍体积的无水酒精，混匀，置- 70 ℃ 两小时或者- 20 ℃ 过夜。

7.1200rpm 离心 10 分钟，沉淀用 70 %酒精洗一次，风干，加入 10ul 与 8ul TE 及 1ul 载样缓冲液混合，电泳检查并根据带的亮度估算其浓度。

三、注意事项

挖含目的 DNA 的凝胶时，尽量减少周围凝胶的带入。