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离体蛙心灌流及药物的影响(斯氏法)

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【目的】 学习离体蛙心制备及灌注方法,观察内环境理化因素的改变和某些神经体液因素及肾上腺素、咖啡因和洋地黄制剂等药物对心脏节律性活动的影响。
【原理】 蛙心离体后,用理化因素类似于两栖类动物血浆的任氏液灌注时,在一定时间内,仍保持有节律的舒缩活动,而改变灌流液的理化性质后,心脏的节律性舒缩活动亦随之改变,说明内环境理化因素的相对恒定是维持正常心脏活动的必要条件。此外,心脏受植物性神经的支配及某些体液因素的调节和药物作用的影响。因此,在灌流液中,滴加肾上腺素、乙酰胆碱及其相应的受体阻断剂心得安和阿托品等药品,可间接观察神经体液因素对心脏活动的影响。
【材料】
(一)动物 蟾蜍
(二)器材 生物 机能系统或BL-420 生物 信号采集系统,张力换能器,探针,外科剪,小手剪,烧杯,滴管,蛙心套管,蛙心夹,铁支架, 试管 夹,眼科镊,丝线,双凹夹,蛙板,蛙足钉等。
(三)药品 任氏液,低钙任氏液,10%洋地黄任氏液或0.1%毒毛旋花子甙K溶液,0.04%洋地黄毒苷任氏液,0.1%盐酸肾上腺素溶液,20%安钠加溶液。
【方法】
1. 取蟾蜍1只,使头向下,将蛙针于枕骨大孔处向前插入颅腔左右摇动,破坏脑组织,再将针插入脊椎管,以破坏脊髓,动物全身软瘫。
2. 仰位固定于蛙板上,先用普通剪刀将胸部皮肤剪开,再将胸部肌肉及软骨剪去,用虹膜剪剪破心包膜暴露心肌。
3. 于主动脉干以下绕一线,左右放平,备结扎用。在主动脉右侧分支下,再穿一线,尽量在远心端扎紧,左手提线,右手以眼科剪于左主动脉上向心剪一V形切口,将盛有任氏液的蛙心套管,通过主动脉球转向左后方,同时用镊子轻提动脉球,向插管移动的反方向拉,即可使插管尖端顺利进入心室,用主动脉干下的线结扎固定。
4. 剪断两根动脉,轻轻提起蛙心套管,再在静脉窦以下把其余血管一起结扎,在结扎下方剪断血管使心脏与蛙体分离,立即以滴管吸去蛙心套内血液,以任氏液反复冲洗数次,直到离体心脏无存血为止。最后套管内任氏液限定1ml。
5. 将蛙心套管固定于铁柱上,用蛙心夹夹住心尖,连于张力换能器,输入生物机能系统进行信号采集、记录和分析。
6. 用下列药物依次滴入套管内,换药前需用任氏液冲洗数次,并记录一段曲线以作对照。
① 20%安钠加溶液2~3滴。
② 0.1盐酸肾上腺素溶液2~3滴。
③ 先换上低钙任氏液,使心收缩力明显减弱后向套管内加入10%洋地黄任氏液4滴(或0.04%洋地黄毒苷任氏液),3~5分钟后再加入4滴,直到心脏出现房室传导阻断。
【实验记录】
记录并打印曲线图
 

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