原理
某些菌属能使丙酮酸脱羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,通过 KOH 和空气的作用,使乙酰甲基甲醇(3-羟基丙酮)转变成双乙酰,双乙酰在α-奈酚和肌酸的催化下,生成红色化合物,为 VP 试验阳性。
材料与仪器
大肠埃希菌 产气肠杆菌
葡糖糖蛋白胨水 VP试液甲液(α萘酚酒精溶液) 乙液(40%KOH溶液)
培养皿 恒温箱
葡糖糖蛋白胨水 VP试液甲液(α萘酚酒精溶液) 乙液(40%KOH溶液)
培养皿 恒温箱
步骤
将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2—5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
注意事项
实验需注意试剂加入顺序,摇匀后静置10min后观察。
常见问题
1.VP是IMViC系列的四项测试之一,测试了肠道细菌的证据。其他三个测试包括:吲哚测试,甲基红测试和柠檬酸测试。
2.VP阳性生物包括肠杆菌,克雷伯氏菌,粘质沙雷氏菌,Hafnia alvei,霍乱弧菌生物型eltor 和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。
3.VP阴性生物包括枸橼酸杆菌属,志贺氏菌,耶尔森氏菌,爱德华,沙门氏菌,弧菌furnissii,河流弧菌,创伤弧菌和副溶血性弧菌。
来源:丁香实验