离体蛙心灌流

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离体蛙心灌流

 

目的原理 观察内环境理化因素相对稳定对维持心脏正常节律性活动的重要作用，了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。

实验对象与用品 大蛙或蟾蜍。斯氏蛙心套管、蛙心夹、蛙板、蛙类手术器械、二道仪、任氏液、长滴管、铁支架等(试剂见实验项目)。

方法步骤

(一)实验准备操作

对蛙行双刺毁，仰卧固定于蛙板上，用铁剪刀剪去胸壁，再用眼科剪小心地剪开心包膜，暴露心脏，识别心脏动脉球、静脉窦(背面)等结构 (图17-1A 、B、C)。用蛙心夹夹住蛙心尖部，蛙心夹用线固定在蛙板上，松紧以动脉、心房、心室拉直呈水平位为合适。于主动脉分支下预埋一条棉线做一虚结备用。把主动脉左支上端结扎，在近动脉球处剪一向心斜切口(注意要剪破血管内膜，每次心缩时有血自切口涌出，但不要把血管剪断。剪口位置视套管尖端长度与心脏大小而定)，左手用眼科镊提起切口缘，右手将注有任氏液的斯氏套管插入动脉干内，然后走手持左侧血管分支上的结扎线向外拉，右手将蛙心套管送入动脉球；把蛙心夹上的连线从固定物上取下，提起心尖，使心室与动脉球约呈100°-200°的钝角，然后当心室缩紧时把套管平直往心室方向推进。当感觉套管进入心室后再把心尖放平，随即将套管稍向心室推进，调整合适位置，可见套管内液面随心跳而升降。即将已作虚结之丝线把血管和套管固定起来，余线则扎于套管的玻璃小钩上，以免心脏滑脱。提起套管，剪断与心脏相连的血管和组织(注意勿损伤静脉窦及两心房)，摘出心脏。用任氏液洗去心内外的余血后，注入新鲜任氏液备用。可在套管的下1/3处结一线作为标志，每次换任氏液时使液面与此线相平。

接好二道生理仪和机械－电换能器(图17-2)选用适当参数，待记录。

(二)实验项目

1.描记正常心跳曲线并分析 其疏密、规律性、幅度、顶点及基线的含义。

2.温度的影响：把套管内换成4℃ 任氏液，同时作好标记，观察曲线变化，待效应明显后，即换入室温任氏液。待曲线恢复正常后，再进行下一项目。以下均如此。换入40℃ 的任氏液，如上观察。本项也可改以冰块、40℃ 热水接触静脉窦，效果更明显。

3.离子的影响：套管内全部换入0.65%NaCl；任氏液中加入1-2滴1%CaCl2混匀；加1-2滴1%KCl于新换的任氏液中,混匀。观察各自的效应。

4.酸碱的影响：加2.5%NaHCO31滴，混匀；加3%乳酸1滴，待效应明显后，再加1滴2.5%NaHCO3，观察曲线的变化。

5.递质的作用：加0.01%肾上腺素1-2滴，混匀；加0.01%乙酰胆碱1滴，混匀。

要求与思考题

1.保证记录连续，及时在曲线上加以注释，分析各现象产生分原因。

2.分析有的蛙心标本套管内液面升降不明显的原因并提出相应的对策。

3.实验过程中套管内液面为什么每次都应保持一定的高度？

4.高Ca2+任氏液与肾上腺素引起的心脏活动变化有何不同？为什么？

注意事项

1.制备标本时，应按指导试探着插管，尽量避免损伤心脏(包括静脉窦)。

2.勿混用滴加试剂的试管；加试剂应由少到多，作用不明显再补加；加后立即用滴管搅匀，使之迅速发挥作用；出现明显效应后，应立即吸出全部灌流液，并以新鲜任氏液换洗，直至恢复正常。

3.随时滴加任氏液于心脏表面，使之保持湿润状态。

4.固定换能器时应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入换能器内造成短路。

组织建议 本次操作难度大，必要时可由教师先示范一只，学生分10组操作，然后从中选2-3个由教师示教各实验项目，以保证动手机会和实验效果。还可演示一下在体心搏曲线描记，并比较分析之。