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染色体分带技术

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染色体显带技术是在显示染色体基础上发展起来的技术,其优点是能显现染色体本身更细微的结构,有助于更准确地识别每条染色体及染色体异常疾病。染色体分带技术能适用于各种细胞染色体标本。
  染色体显带是沿着整条染色体的长轴,能显现出着色深浅不同、横向走的带型。目前认为染色体显带现象是染色体结构所致。但用特殊方法处理后,再用染料染色,则带型更加清晰,随显带方法不同,显现出的带型的特点也不一样,这说明带的出现与染料的特异结合相关。人类染色体能显现出近2000个G带,这些带再融合成一般显微镜下可见的850条左右的高分辩染色体带型或350条带左右的常规带型。
常见的几咱显带方法:
(一)、G带
  也称为G显带,是最常用的显带方法,具有操作简便、经济及标本能长期保存等优点。
1、Giemsa原液的配制:
  (1)称3.75gGiemsa粉置研磨器中,加少许丙三醇研磨,研磨越细越好;
  (2)将研细的Giemsa加丙三醇移入500ml棕色瓶内,丙三醇的总量为250ml,用一定量甲醇洗干净研磨器。
  (3)摇匀,置60℃水浴锅24小时或37℃温箱72小时,经常摇动。
  (4)取出冷却后,加甲醇总量至250ml混匀,密封棕色瓶备用。贮藏时间越长,染色效果越好。
2、实验材料:
  中期染色体标本;
  0.9%氯化钠注射水;
  3%tris液体;
  0.25%胰蛋白酶;
  Gremsa染色液;
  蒸馏水;
  水浴锅;
  立式染缸;
  定时器或时针;
  温度计;
  镊子及纱布;
  刻字笔;
3、操作程序:
  (1)消化液配制:取0.9%氯化钠注射水100ml,加0.25%胰蛋白酶1ml,制成0.025%胰蛋白酶盐水消化液,加4-5滴tris液调PH6.8左右,移消化液于立式染色缸并置37℃水浴锅中备用;
  (2)染液配制:取立式染缸,加蒸馏水500ml,加3滴tris液调PH并加入Giemea染液1ml左右,用吸管调匀备用;
  (3)漂洗液:取立式染缸一个,内加蒸馏水备用;
  (4)试消化:待消化液温度在37℃左右时,取同批标本较多者标本1张,分二节或三节进行消化,每节相差十五秒左右,从45秒或60秒开始增减。取出后先在纱布或吸水纸上直立除去带出胰蛋白酶,后置蒸馏水染缸内漂洗,取出后,标本斜面朝上,刮去染色缸内染液上浮膜,沿槽插入,每分钟移动1次,染色3-5分钟。

 

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