去壁低渗法制备植物染色体标本

一、实验目的
掌握用去壁低渗法制备植物染色体标本的技术。
二、实验原理
低渗法原为人类和哺乳动物染色体标本的制备方法，后引用于植物。植物根尖分生组织细胞，经果胶酶和纤维素酶处理后，其中胶层的果胶质及纤维素构成的细胞壁被消化，成为游离的原生质体。然后用低渗溶液处理，使细胞核中的染色体，向细胞质中自然扩散，经固定、火焰干燥、染色，即可制备出染色体长度适中、集中而不重迭、各部分形态结构清晰的优良染色体标本。避免了压片法的缺点，特别适于染色体小且多的植物。
三、实验材料
各种植物种子均可用。
四、实验器具和药品 试剂
显微镜、温箱、冰箱、培养皿、镊子、小瓶、载玻片、酒精灯、切片架。
秋水仙素、KCL、2.5％的果胶酶和纤维素酶混合液、甲醇、冰醋酸、Giemsa原液、磷酸缓冲液。
五、实验方法和步骤
(一) 材料培养 种子在恒温条件下发芽培养，待根尖长至0.5～1厘米时进行前处理。
(二) 前处理 切取0.5厘米长的根尖，用0.2％秋水仙素处理2小时，或用 0.002M 8-羟基喹啉处理2～4小时。
(三)前低渗 吸干预处理液，滴入0.075M KCL溶液，在室温下处理30分钟，其中更换低渗液两次。
(四)去壁 吸干低渗液，用 蒸馏 水洗一次，滴入2.5％果胶酶和纤维素酶混合液，以全部材料浸没为度，加盖，在30℃条件下处理2～5小时，其中将材料瓶轻轻摇动数次，促使酶反应充分。
(五)后低渗 吸干酶液(将酶液放到另一棕瓶置冰箱内保存，可反复使用)，用 蒸馏 水慢慢洗2次，然后在蒸馏水中静止10～20分钟，进行后低渗。
(六)固定 吸干蒸馏水，加入新配制的甲醇 ：冰醋酸(3：1)固定液3毫升。
(七)制片 取根尖1～3个，放在清洁的载片上，加一滴固定液，用镊子将根尖挟碎，如太干，可再滴一滴固定液再行挟碎，去掉残渣。
(八)火焰干燥 将载片在酒精灯焰火上微微烘烤。
(九)染色 用10％Giemsa染液染20分钟，也可用改良苯酚品红染色液染色。
(十)镜检 将载片水洗后稍干，用显微镜找出分散好的染色体中期分裂相。