巴氏（Barr）小体检查

一、目的
观察性染色体的特殊存在形式，学习X染色质的检查方法。
二、原理
巴代小体，亦称X染色质，目前认为在哺乳类动物中，正常雌性个体两条X染色体。在不分裂的细胞中，只有一条X染色体活化，另一条固缩，固缩状态的X染色质能被碱性染料所深染。在雄性个体中，性染色体为XY型，一般无固缩状态的X染色质，故检查不出，有人实验统计得出，在雌性动物中，X染色质检出率为56-87%，雄性动物中为2-6%。
性染色质的位置大部分紧贴核膜，其形态常呈三角形、馒头形、少部分游离于核内呈园形或椭园形，贴核膜的则是性染色质的侧面形态。
三、用具及药品
显微镜、镊子、染色缸、载玻片、酒精、快绿染液、猩红染液、牙签
四、实验方法
（一）猩红一块绿染色法：
1．取牙签在口腔两颊表面刮取口腔细胞，弃去第一次刮取的细胞用第二次刮取的健康细胞在洁净的载玻片上轻轻地涂上一层。
2．将涂片立即放入95%的乙醇中，固定至少30分钟。
3．再浸入70%乙醇中2分钟。
4．在猩红染液中染色2分钟。
5．在50%乙醇中冲洗一次。
6．在固绿中染色1-4小时，分染过程中，每小时在低倍镜下检查一次分染情况。当细胞质，园泡状核呈现为绿色，固缩核呈现红色为止。
7．用50%乙醇洗涤，并放置5分钟。
8．依次在70%、95%、100%的乙醇中各脱水2分钟。
9．二甲苯透明两次，每次2分钟。
10．中性树胶封片。
11．镜检：经猩红一快绿染色的标本，细胞质呈淡绿色或无色，细胞核呈绿色，一般染色质颗粒呈绿色或蓝色，性染色质呈亮紫红色。
（二）硫堇紫染色法
1．将取材和固定后的标本浸入 蒸馏 水中片刻。
2．再浸入5N的HCl中水解20分钟，水解过程中，HCl的温度保持在20-25℃。
3． 蒸馏 水中漂洗三次。
4．硫堇紫 缓冲液 内染色30分钟左右。
5．蒸馏水中漂洗3次。
6．在50%乙醇中漂洗一次，
7．70%乙醇中分化。分化过程中，注意镜检，使标本分化至所需的清晰度。
8．依次在80%、90%、100%的乙醇中脱水。
9．在二甲苯中透明两次。
10．中性树胶封片。
11．镜检。
（三）醋酸洋红或石炭酸复红染色法
1．用口腔粘膜细胞涂片，涂片后立即投入95%的乙醇中，固定30分钟，空气干燥。
2．干燥后，投入70%乙醇中浸5分钟。
3．蒸馏水漂洗二次，每次5分钟。
4．用石炭酸复红染色1-2分钟。
5．在95%、100%乙醇中各1分钟，阴干。
6．二甲苯透明，树胶封片。
7．显微镜下观察。
五、作业
绘制你所看到的含有巴氏小体的细胞核图。
附：染液的配制
1．猩红染液的配制：
           猩红          1.0克
           磷钨酸         0.3克
           冰醋酸         5ml
          50%酒精          100ml
2．快绿染液的配制
快绿             0.5克
磷钨酸          0.3克
50%酒精        100ml
磷钼酸          0.3克
冰醋酸          5ml
3．硫堇紫 缓冲液 的配制：
（1）将硫堇紫染料加入50%乙醇中，使达饱和即可。
（2）缓冲液：醋酸钠           0.914克
             巴比妥钠         14.714克
             蒸馏水           500ml
（3）0.1N   HCl
取28ml的（2）液加到32ml的（3）液中，再加（1）液至总体积达到100ml。
4．石炭酸处长红染液的配制
（1）复红原液（可保存几个月）
取碱性复红3克，溶于100ml的70%乙醇中。
（2）石炭酸复红染色液
复红原液                    10ml
5%石炭酸水溶液             90ml
冰醋酸                     10ml
37%甲醛                    10ml
染液配成后，放置24小时，过滤方可使用。