单聚及二聚核小体的纯化实验

1. 解冻约 1 ml 寡聚核小体（约 1～2 mg/ml 比较理想），预热到 30℃。

2. 加入 100 mmol/L CaCl₂ 至终浓度为 1.5 mmol/L， 1 mol/L MgCl₂ 至终浓度为 3.5 mmol/L。

3. 加入 50 U/ul 微球菌核酸酶至终浓度为 0.1 U/ug 多聚核小体，30℃ 消化 10 min。

4. 加入 0.5 mol/L EDTA 至终浓度为 15 mmol/L 终止反应。

5. 4℃，10 000 g 离心 30 S，沉淀不溶物质。

6. 在 0.5 in×2. 5 in 聚异质同晶超速离心管中铺制4. 7 ml 线性梯度，上层为 10％ 甘油梯度缓冲液，下层为 30％。

7. 将 0.5 ml 消化反应液放置在梯度上，4℃，100 000 g 离心 18 h （如 Beckman SW55 转子 35 000 r/min）。

8. 收集梯度， 每 5 滴流出液回收一管，大约有 24 管。

9. 进行琼脂糖凝胶电泳分析各流出液。

10. 如有需要，将得到的单聚和二聚核小体组分进行浓缩，但最后用 10％ 甘油梯度缓冲液进行透析）。4℃ 保存 1 个月以上，或在液氮或干冰上速冻，在 -80℃ 保存两年以上。