NLRP3炎症小体与焦亡

还可以用扫描电镜观察细胞形态（细胞膜破裂、细胞膨大&变形、细胞器变形）

焦亡（pyroptosis）是一种炎症性细胞死亡方式，与NLRP3炎症小体复合物和caspase-1活化相关。对于判断细胞是否发生焦亡，仅检测NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18等指标是不够的。

要全面评估细胞是否经历焦亡，可以考虑以下指标：

1. NLRP3炎症小体复合物：NLRP3、ASC和caspase-1是焦亡途径中的核心组分，它们形成复合物来介导焦亡反应。

2. 炎症因子：焦亡会导致促炎细胞因子的释放，如IL-1β和IL-18。检测这些炎症因子的产生可以提供焦亡的证据。

3. 细胞形态学变化：焦亡会导致细胞肿胀、胞浆外渗和细胞膜破裂等特征。可以通过显微镜观察细胞形态学的变化来判断是否发生了焦亡。

4. DNA损伤：焦亡可引起细胞核内DNA的降解。检测DNA片段化（例如，TUNEL染色）可以提供焦亡的证据。

5. Gasdermin D（GSDMD）：GSDMD是一个关键的焦亡执行者蛋白，它在焦亡过程中参与细胞膜孔形成和细胞溶解。检测GSDMD的裂解或其N端的释放可以作为焦亡的指标之一。

综上所述，焦亡的判断需要综合考虑NLRP3炎症小体复合物的形成、炎症因子的产生、细胞形态学变化、DNA损伤以及GSDMD的裂解等指标。这些指标的检测可以帮助确认细胞是否经历焦亡。根据具体实验需求，您可以选择合适的指标进行检测和分析。

细胞焦亡验证指标：

Gasdermin D

细胞焦亡发生时，Gasdermin D（GSDMD，53KD）被切割，产生30KD左右的片段，可以购买GSDMD一抗，用Western blot（WB）来验证。

Caspase-1、Caspase-4

细胞焦亡发生时，caspase-1和caspase-4被激活，可以通过检测caspase-1和caspase-4的活性来验证。