人类巴氏小体的观察
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1,掌握人类x小体(巴氏小体)玻片标本制作方法
2,观察识别巴氏小体形态特征及所在部位,
鉴定个体的性别。
二、原理
巴氏小体又称X小体:正常女性,位于间期细胞核 中,紧贴核膜内缘,大小约1~1.5 um,呈现三角或椭圆形小体,数量为x染色体数减一。巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
Lyon的剂量补偿学说认为:女性有两个X染色体 ,但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性,而另一个是晚复制的,没有活性。该失活的染色体在形态学上
呈异染色体,即DNA螺旋压的很紧,染色深而致密,称之为巴氏小体。
三、实验材料
口腔粘膜细胞,毛根鞘细胞显微镜,载玻片,盖玻片,牙签,吸管固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),生理盐水,
苯酚品红染液
四、实验步骤
1)取材
口腔粘膜细胞:受检者清水漱口数次,用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜,原位刮2~3次,第一次舍去,第2,3次分别涂于干净载玻片上。
发根细胞:拔取女性带有毛囊的头发(约2cm),置于载玻片上。
2)固定
将置于离心管中的材料(口腔粘膜细胞),首先2000rpm离心20min,弃上清,加入新配置的固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),37℃下静置30min,再1000rpm离心15min弃上清,加入1ml固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)制成细胞悬液。
置于载玻片上,待材料干后滴加固定液(95%乙醇:乙醚=1:1)固定1h,空气干燥。
3)染色、制片
细胞悬液一滴于载玻片上,固定20min,蒸馏水洗2~3min,1N盐酸37℃水浴20min,晾干,滴加1~2滴染液染色20~30min(勿干),细水洗去染液,晾干。
直接涂片的:滴加染液,室温20~30min(勿干),加盖玻片,压片。
发Ḋ细胞:拔掉毛干,直接滴加5N盐酸于毛囊细胞处,处理5min,吸去盐酸,滴加染液,染色20min,加盖玻片,压片。
五、镜检
在高倍镜或油镜下观察(巴氏小体)