常规抗体芯片制作与检测的流程

• 蛋白芯片与抗体芯片

（一）蛋白芯片概述
由于基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化，而真正发挥功能的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成，因而对蛋白质的直接研究才能真实的解释各种生命现象。但是目前研究蛋白质的手段和方法还没有很大的发展，所以寻找有效、快捷的蛋白分析技术成为了至关重要的一个环节。蛋白芯片技术的出现给蛋白组学研究带来新思路。蛋白质芯片，也叫蛋白质微阵列 ( protein microarray)，是将大量蛋白质有规律地固定到某种介质载体上，利用蛋白质与蛋白质、酶与底物、受体与配体、抗原与抗体、蛋白质与其他小分子之间的相互作用，借以检测和分析蛋白质的一种技术。
蛋白质芯片的应运而生既是基因芯片功能的延续又是进行蛋白组学研究的需要。作为一种高通量的生物芯片技术，蛋白质芯片被广泛应用于构建蛋白质表达谱，进行抗原-抗体筛选，药物靶点筛选，蛋白质-蛋白质相互作用等蛋白组学研究。
蛋白质芯片主要有无活性（non living）和活性（living）两种形式。无活性的蛋白质芯片是通过将已经合成好的蛋白质探针点在芯片上制成，而有活性的芯片则是在芯片上直接点上生物体 (如细菌 ) ，通过在芯片上原位表达蛋白质来发挥作用。活性芯片可以提供模拟的机体内环境，对于蛋白质功能分析更为有利一些。
（二）抗体芯片
利用蛋白质芯片分析蛋白质功能已成为一种趋势。通常，一个蛋白质芯片上可以容纳一种蛋白质的所有变异体，一个蛋白质家族的所有成员，一条信号通路中的所有蛋白质，甚至是来自一种组织、器官或有机体的所有蛋白。蛋白质芯片利用位于芯片表面上的探针来捕获各种待检测的蛋白质，最常用的探针是抗体，这是由于抗原-抗体的反应有着非常强的特异性。这种以各种抗体为探针的蛋白质芯片常被称作抗体芯片。
作为一种重要的蛋白质芯片类型，抗体芯片已经成为蛋白芯片中发展最快、技术更成熟的 生物 芯片。第一张商品化的 抗体 芯片是由美国BD Clontech公司推出的Ab Microarray 380。这是一张用于研究的 抗体 芯片，该芯片上排列了378种已知蛋白的单抗，这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和功能上十分重要的蛋白，涉及信号传导、肿瘤发生、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡等广泛的领域。Ab Microarray 380上所点的抗体都是经过精心挑选的，这些抗体不仅可以识别人源的蛋白，对小鼠和大鼠样品同样有效。同时，每个抗体的结合亲和力都经过了实验测定，从多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性好，交叉反应程度小，信号明显的抗体，保证了信号与抗原浓度有着良好的线性关系。通过这张芯片，我们在一次实验中就能够比较几百种蛋白的表达变化。目前，已有一大批抗体芯片面市，其中有的抗体芯片已经在向临床应用上发展，成为重要的诊断工具，如肿瘤标志物抗体芯片等。