淋巴细胞杂交瘤与单克隆抗体生产

   每个B淋巴细胞都仅专一地产生、分泌一种针对某种抗原决定簇的特异性抗体。
    单克隆抗体:从某个特定B淋巴细胞培养繁殖出大量的细胞群体，它们的遗传性质高度一致,由其分泌出的抗体即叫作单克隆抗体。        
 
1 亲本选择
1.1瘤细胞
    最好是同种的骨髓瘤或浆细胞瘤系
    不产生自身基因所编码的抗体
    对选择剂敏感 （一般为HGPRT或TK缺陷型）
1.2 抗体生成细胞
    高度免疫个体的激活淋巴细胞是B细胞的最佳来源
1.3 饲养细胞
 
2 细胞融合   常用PEG法：
将免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞以1:2~l:10的比例混匀,
®置于50ml尖底离心管内
® 1200r/min离心7~10min
®尽量吸净上清液
®轻弹管壁,使管底沉淀的细胞铺展成薄层
®在室温条件下一边轻轻振摇离心管，一边在60s内逐滴加入50%的PEG 0.5ml(pH8.0~8.2)
®静置90s
®于5min内边振摇边逐滴加入5~10ml不含血清的培养液或盐水缓冲液,以终止PEG的作用
®静置10min,并用滴管轻轻吹打数次,使细胞团块分散
®加入选择培养液稀释至骨髓瘤细胞数不超过2´10 ⁵ ml
®加入96孔培养板内,每孔0.lml,该孔巳含有0.lml饲养细胞（约为1´10 ⁴ 个腹腔细胞）
 
3 杂合细胞的筛选
    常用HAT选择培养基,含有次黄嘌呤（H）,氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶(T)。
    融合细胞能在HAT培养液中生存。
    未融合的酶缺陷型骨髓瘤细胞将在HAT中死亡。 
    未融合的正常B细胞在体外只能短期生存,由于不能增殖最终也死亡。