琼脂凝胶电泳

在凝胶电泳中，琼脂凝胶电泳是最早得到广泛应用的。因为它具有下列 优点：①在琼脂凝胶中含有琼脂1%~1.5%，其余都是水，在这种凝胶中电泳， 近似自由界面电泳，可是样品扩散又比自由界面电泳小；②琼脂凝胶电泳支 持物均匀，电泳区带整齐，分辨率高，重复性好；③液相与固相界面无明显 界限，电泳速度快；④琼脂凝胶透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测 仪测定；⑤区带容易染色，样品容易洗脱，利于制备；⑥干膜可以长期保存。 除以上的优点外，琼脂凝胶电泳也有它的不足之处，因为琼脂是一种强 酸性物质，能造成严重的电渗现象，影响电泳的速度，而且琼脂所含可溶性 杂质难于除去。
琼脂凝胶电泳肺痨板式和柱式两种，一般采用平板式。其实验步骤如下： 1、配置缓冲溶液琼脂凝胶电泳常用缓冲溶液的pH 值多在6~9 之间， 离子强度为0.02~0.05。离子强度过高时，由于大量电流通过琼脂板将产生 热量，使板中水分大量蒸发而析出盐的结晶，甚至使用琼脂板断裂，电流中 断。常用的缓冲溶液，有硼酸盐缓冲液和巴比妥缓冲液。
2、制板制板常用的琼脂浓度为1%~1.5%。因为用这个浓度制成的凝 胶富有弹性、坚固不脆。将一定两的琼脂用 水浴 加热熔化，趁热与等体积预 热至60℃的缓冲液混合，使其浓度为1%~1.5%，继续加热至表面无气泡， 迅速将凝胶倒在水平玻璃板上，使其厚度约为3mm，冷却后即成琼脂板（注 意这里所用缓冲液的离子强度必须比电泳时的离子强度高1 倍）。
3、点样加样方法二：一是挖槽法，在琼脂板的中央挖一长方形小槽， 将在 水浴 上熔化至42~45℃的琼脂与样品等量混合，倒入小槽中，也可直接 将样品倒入小槽中；另一种是滤纸插入法，在琼脂板上适当的位置用刀片切 一裂缝，插入蘸有样品的厚滤纸片，纸片的宽度与琼脂板厚度一致。样品浓 度一般以4%~5%为宜。
4、电泳加样完毕后，将琼脂板轻轻放在电泳槽上，两端用几层滤纸 与电极槽缓冲液连接。接通电源，调节电压。一般电场强度为6V/cm。
5、固定和染色将电泳后的琼脂板浸入70%酒精配制的2%醋酸溶液 中15~20 分钟进行固定。固定后的琼脂板，需用自上而下为水漂洗数次，然 后放在40℃左右的 烘箱 中烘干，这时 琼脂 板成一薄膜，附于玻璃板上，再 以适当的显色剂显色。