生物发光和化学发光BL/CL成像
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生物发光和化学发光 BL/CL 成像
弱光成像设备是基于超高灵敏度的CCD相机可以检测到由样品表面发生特定的反应后发射出来的光。这些设备不但可以在单分子水平定量发光的强弱,还可以进行定位。他们可以用来分析大样品,比如凝胶、膜、微孔板,培养皿、整个器官或活体动物,其空间解析度(BL/CL信号)可达100-200mm。而通过与光学显微镜的配合,他们还可以用来分析微样品,比如组织切片、单细胞或者微芯片设备,其空间解析度高达0.4mm。虽然保持了高度的检测能力,但是通过选择合适的光学系统可以将光损失最小化。
组织切片和单细胞
原位CL(化学发光)杂交检测方法是基于标记的寡核苷酸探针与目标核酸序列特异性原位杂交,再进行CL检测。这种方法不但可以定位还可以定量检测在细胞或组织中目标序列的数量。目前已发展了数种可以在组织或细胞中单检测或双检测病毒核酸的CL原位杂交方法。在人皮肤组织样本中检测人乳突淋瘤病毒(HPV)。 CL显微镜成像比比色或荧光检测技术具有更高的灵敏度,其表现甚至超过同位素。因此,CL检测目前已经成为可以对传染病或其他遗传、癌症等疾病快速早期诊断强有力的工具。
Ex vivo 全组织
作为一种简单而可靠的模式,分离并灌注器官被广泛的应用在各种生物学功能的研究方面。BL/CL成像已经被应用到病生理过程的ex vivo研究中。氧自由基(OFR)相关氧化过程藕耦连而自发产生微弱的光子。超低的发光与增强化学发光,目前已经广泛的应用于研究整体器官氧自由基的形成。目前已发展出一套实时定量的CL成像方法,可以检测分离和灌注鼠肝脏中由于缺血灌注而造成的氧化损伤,并通过研究第一次揭示了鼠肝脏表面的超氧自由基的空间分布和特异性脱氧剂的作用。光子在穿透过组织时,会发生光的吸收和散射,以及其他光学现象。为了获得准确可靠的数据,必须考虑到这些因素。
体内全动物
BL/CL反应所产生的可见光可以部分的透过动物组织,因此可以在整体动物的模式下进行成像。BL全体细胞和分子成像作为一种灵敏、可定量、非侵入性的和实时的方法,可以用来对活体动物进行生物学研究,并将对生物技术、分子医学、基因 治疗和药物研发等领域产生深远的影响。