生物发光和化学发光BL/CL用于免疫检测

 

BL/CL已经广泛的应用到免疫检测中进行标记物的超灵敏检测。CL免疫检测不但可以通过以CL分子直接标记抗原或抗体，也可以以CL底物标记可被检测的酶。现在，80%的常规临床分析的免疫检测都是使用酶标记。相比同位素检测，CL检测以其更加灵敏和可检测性获得越来越多的应用。依赖于碱性**酶（AP）的CL检测和依赖于辣根过氧化物酶的增强性CL检测是最常用的形式。

BL反应也已经被证明是检测酶标记的极为灵敏的方法，依赖于萤火虫荧光素酶热稳定突变体标记的醋酸激酶BL检测可以得到极低的检测极限(8.5x10-23 mol)。作为一种新的生物技术工具，BL/CL免疫检测具有一个光明的前景。

BL免疫检测中利用发光蛋白（例如，重组水母蛋白）或者一个编码萤火虫荧光素酶基因片段作为标记。多种双功能生物发光分子已经被准备应用到免疫检测中。例如：通过BL蛋白与生物素蛋白受体多肽融合获得的热稳定萤火虫荧光素酶-生物素复合体；化学抗体与一个特异性抗体和BL标记；通过一个BL蛋白或者一个合适进行CL检测的酶与被检测蛋白或多肽的融合，从而获得BL/CL tracer进行竞争性免疫检测[。随后的方法将比传统的化学结合的方法更为方便。

这些方法中分析物：标记物恒定1：1的摩尔比非常适合与研发超灵敏的检测方法。融合蛋白已经被用于基于BRET的开放式三明治式BL免疫检测（OS-BLIA），此方法以被证明比基于FRET的检测方法更为灵敏。这种方法是依赖于抗原的抗体重链和轻链的重聚，其分别与Rluc或EYFP融合。

CL 和 BL现在已经越来越多的在蛋白分析的western杂交中使用。例如球蛋白（显性）印迹检测和利用免疫印迹检测牙龈缝流体中伴放线放线杆菌的IgG抗体亚型。