材料与仪器
DNA
生物素 磷酸酶
紫外灯 离心机
生物素 磷酸酶
紫外灯 离心机
步骤
1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过夜。
2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用最适的时间交联。
3. 用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。
3. 用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。
4. 杂交后、将膜置于杂交袋中。
5. 封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。
6. 加入1体积的封阻液、室温作1 min 轻微摇动、倒干溶液。
6. 加入1体积的封阻液、室温作1 min 轻微摇动、倒干溶液。
7. 加入1 mg/ml 链亲和素至1体积的封阻液至终浓度为1 μg/ml，在杂交袋中室温温育4 min，轻微摇动，倒干溶液。
8. 加入10体积诜液 I，室温洗膜4 min 轻微摇动，倒干溶液，重复1次。
9. 加入生物素酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液，室温作用4 min 轻微摇动、倒干溶液。
10. 用10体积洗液 I 洗膜2次，同步骤8。
8. 加入10体积诜液 I，室温洗膜4 min 轻微摇动，倒干溶液，重复1次。
9. 加入生物素酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液，室温作用4 min 轻微摇动、倒干溶液。
10. 用10体积洗液 I 洗膜2次，同步骤8。
11. 用0.5体积底物稀释液稀释化学发光底物，在杂交袋中室温作用4 min 轻微摇动，打开杂交袋，尽可能倒干溶液。
12. 压平杂交袋上的折皱，重新封口，结合核酸的一面向上，用一张X光片压好，在暗盒内曝光10~20 min。
12. 压平杂交袋上的折皱，重新封口，结合核酸的一面向上，用一张X光片压好，在暗盒内曝光10~20 min。
来源：丁香实验
