生物素酰化探针的检测实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

与放射性标记探针的比活不同，生物素标记探针的可检出性在于每千碱基对中掺入的生物素分子的数量，它可用比色法检测。

来源：丁香实验

操作方法

比色法

1. 用DNA稀释缓冲液，稀释生物素酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。 2. 对干硝酸纤维素滤膜：每个稀释度取1 μl 点膜，在80℃供干约1 h接步骤4。 3. 对于足龙膜：每个稀释度取1 μl 点膜，晾干后用紫外照射法将DNA交联至膜上。接步骤4或化学发光检测。 4. 用少量体枳AP7.5液沆膜1 min，在

化学发光法

1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过夜。 2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用最适的时间交联。 3. 用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。 4. 杂交后、将膜置于杂交袋中。 5. 封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。 6. 加入1体积的封阻液、室