体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性黏附肽结果

互联网2010-12-02

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体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性黏附肽结果

1．荷瘤裸鼠肝癌特异性结合短肽的体内筛选

我们把原肽库中噬菌体注入荷瘤小鼠体内，经血液循环，回收肝癌组织中的噬菌体，扩增后作为第二轮筛选的起始物。用10¹¹ 转导单位启动下一轮筛选过程，共筛选3次。筛选结果用柱形图表示。

三轮筛选中组织噬菌体回收率

2．免疫组织化学结果

在第一轮筛选的荷瘤裸鼠各组织中，瘤、肝、脑3种组织出现阳性反应；第二轮筛选大大减少了脑组织中的非特异性结合；经第三轮筛选，瘤组织中的噬菌体得到高水平的富集，同时其他各组织的非特异性结合降至最低。由于肝组织中存在丰富的网状内皮系统，产生非特异性的吸附作用而未被去除，这与噬菌体的特异性结合无关。

免疫组织化学结果

3。细胞ELISA结果

随机挑取140个噬菌体单克隆进行细胞ELISA鉴定，结果如图

由图可知，与肝癌细胞特异性结合最强的是A54号单克隆，A67、B2号次之。

细胞ELISA鉴定结果

4．体内回输结果

将A54号噬菌体回输荷瘤裸鼠体内，通过比较肝脏、肾脏以及肿瘤等组织中每克组织噬菌体回收率以及免疫组织化学结果，可以看出该噬菌体单克隆在体内具有很好的导向效果。

A54号克隆在体内各组织中分布

5．序列测定

随机挑选50个单克隆进行测序。通过序列分析我们可以发现以下基序(括号中代表序列重复次数)。

PSS／PTT基序

体内噬菌体展示技术创造性地将常规的噬菌体展示技术与动物荷瘤模型相结合用以进行更可靠的肿瘤组织特异性结合肽的筛选。早在1996年，Pasqualini和Ruoslahti首次报道利用该方法筛选到了与脑和肾特异结合的噬菌体肽。1997年他们成功的筛选出一条包含RGD序列的短肽，它可与恶性黑素瘤和乳癌的整合素。(υ亚基)发生特异性结合。1998年，他们又把该肽和另外一条包含NGR序列的肽段和化疗药物多柔比星(阿霉素)进行偶联，对异体移植乳癌的裸鼠进行实验，收到很好的抗肿瘤效果。目前，人们已发现多条特异性亲和人肿瘤血管的短肽，如RGD―4C，CNGRC，GSL，SMSIARL，CPGPEGAGC等。前述两条短肽已经在动物身上进行了抗肿瘤活性测定，抗癌效果良好。SMSIARL序列是与前列腺特异结合的短肽，CPGPEGAGC是与乳腺特异结合的短肽，两者都显示了很好的结合特性。