氯化镧抑制TNF-α诱导NF-κB信号通路活化
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氯化镧抑制
TNF-
α诱导
NF-
κ
B
信号通路活化
观察氯化镧
对NF-κB信号通路中关键分子的蛋白表达和磷酸化及NF-κB／p65亚基与靶基因结合能力的影响，探索氯化镧抑制NFκB活化的可能作用位点。以1×106
个／ml接种细胞于含10％胎牛血清的RMPll640液体培养基中，于5％C02
、37℃,恒温培养，随机分组如下：①TNFα组：以含TNFα20ng／ml的无血清培养基培养Hela细胞。②氯化镧+TNF-α组：分别以含氯化镧5，25，50和100gmol／L的培养基培养Hela细胞4h后弃培养基并以无热原生理盐水漂洗细胞三遍，再加入含TNFα 20ng／ml的培养基继续培养。③空白对照组：培养基为不含血清，不加氯化镧和TNFα。④氯化镧对照组：以含氯化镧100gmol／L的培养基培养Hela细胞。各组细胞根据检测方法的要求分别培养于24孔培养板或培养瓶中，于30min后，收集培养上清、细胞待检。运用Westernblot技术测定胞浆提取物中IrBa蛋白表达和磷酸化水平及胞核提取物中NF-κB／p65蛋白表达水平；最后用Transcription Factor Assay kit试剂盒测定胞核提取物中p65蛋白与DNA靶序列结合能力。
结果表明：(1)氯化镧对TNF-α诱导的IκBa磷酸化和降解的抑制作用：TNF-α能够诱导Hela细胞中IκBa的磷酸化和降解。随着氯化镧处理的浓度不断升高，IκBa表达水平逐步升高，而磷酸化水平不断降低。表明氯化镧能够抑制TNF-α诱导的IκBa的磷酸化和表达水平的降低，且该效应随着随着氯化镧浓度的升高而逐步增强。(2)氯化镧对TNF-ct诱导的NF-κB活化的抑制作用：25―100μmol／L氯化镧能够显著抑制TNF-α诱导胞核NF-κB／p65蛋白表达水平，5―100μmol／L氯化镧还能显著减弱Hela细胞中NF-κB／p65与靶DNA结合活性，上述抑制效应呈剂量依赖关系。
NF-κB的激活剂TNF-α通过磷酸化IκBa，导致IκBa降解，使NF-κB／p65转位入核与靶基因启动子结合，以启动相关基因的表达；氯化镧通过阻断TNFα诱导IκBa磷酸化，抑制IκBa的降解和NF-κB／p65转位入核并阻断NF-κB／p65与靶基因的结合。
