【求助】NFκB
丁香园论坛
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各位大侠,我是一个新手。
最近看NFκB通路,想知道测NFκB的mRNA表达量有意义么?还是IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的。
希望不吝赐教!
最近看NFκB通路,想知道测NFκB的mRNA表达量有意义么?还是IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的。
希望不吝赐教!
丁香园里面的大虾们,咋都不见了呢。
楼主您好!
对于NFκB通路以及您的问题,我有以下几点建议吧:
1. 我不知道楼主您是单纯想看NFκB通路有没有激活还是NFκB的表达量的改变?两者其实还是有区别的,因为单纯的NFκB量的改变(无论是mRNA还是蛋白水平)不一定代表着NFκB通路的激活,即NFκB转录活性的改变,我的问题就是说楼主到底是想看NFκB量的改变还是转录活性的改变?我觉得这个要先区分;
2. IκBα在NFκB通路被激活的时候从复合体释放出来,进而NFκB二聚体进入细胞核内发挥转录活性,很多时候可以看到IκBα的表达上调,但不是绝对的,因此更不能说IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的量;两者不是同一个概念,对于以上两点,建议楼主先多回顾一些NFκB的综述,相信你看完后会对NFκB通路有更深的了解;
3. 个人建议你先在mRNA水平和蛋白水平检测NFκB和 IκBα的表达水平(RT-PCR和WB);再检测细胞核内NFκB的水平(WB和IF),观察有无核转位;再通过荧光素酶报告基因(或EMSA一定程度上也行)看NFκB的转录活性有无改变,这样就能详细的知道NFκB的活化情况,如果有条件可以再检测一下NFκB的下游基因或者靶基因的改变,证实NFκB的活化,我觉得思路可以按前面我说的这样试试,楼主您觉得呢?
个人建议和意见,大家共同学习和提高。
对于NFκB通路以及您的问题,我有以下几点建议吧:
1. 我不知道楼主您是单纯想看NFκB通路有没有激活还是NFκB的表达量的改变?两者其实还是有区别的,因为单纯的NFκB量的改变(无论是mRNA还是蛋白水平)不一定代表着NFκB通路的激活,即NFκB转录活性的改变,我的问题就是说楼主到底是想看NFκB量的改变还是转录活性的改变?我觉得这个要先区分;
2. IκBα在NFκB通路被激活的时候从复合体释放出来,进而NFκB二聚体进入细胞核内发挥转录活性,很多时候可以看到IκBα的表达上调,但不是绝对的,因此更不能说IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的量;两者不是同一个概念,对于以上两点,建议楼主先多回顾一些NFκB的综述,相信你看完后会对NFκB通路有更深的了解;
3. 个人建议你先在mRNA水平和蛋白水平检测NFκB和 IκBα的表达水平(RT-PCR和WB);再检测细胞核内NFκB的水平(WB和IF),观察有无核转位;再通过荧光素酶报告基因(或EMSA一定程度上也行)看NFκB的转录活性有无改变,这样就能详细的知道NFκB的活化情况,如果有条件可以再检测一下NFκB的下游基因或者靶基因的改变,证实NFκB的活化,我觉得思路可以按前面我说的这样试试,楼主您觉得呢?
个人建议和意见,大家共同学习和提高。
最近做NF-KB的同学不少啊
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师兄微信号:shixiongcoming